Путь:
Навигация
- Декреты СССР 1917-1992
- Законы СССР 1917-1992
- Инструкции СССР 1917-1992
- Обращения СССР 1917-1992
- Письма СССР 1917-1992
- Положения СССР 1917-1992
- Постановления СССР 1917-1992
- Правила СССР 1917-1992
- Приказы СССР 1917-1992
- Прочие СССР 1917-1992
- Распоряжения СССР 1917-1992
- Указы СССР 1917-1992
- Циркуляры СССР 1917-1992
Язык [ РУССКИЙ ]
Новые материалы
- Геноцид собственного народа или зеленская чума 21 века 2024-04-27
- Бизнес-ланч как организовать обед с выгодой 2024-03-23
- Болезни, которые успешно лечатся в современных клиниках 2024-03-10
- Пополнить Steam Пополнение Счета через Steam 2024-03-05
- 10 способов оптимизации пространства в маленькой ванной 2024-02-03
- Магия звука выберите подходящий музыкальный инструмент для вашего творчества 2024-01-22
- Куда можно поехать отдохнуть в России 2024-01-22
- Преимущества доставки еды комфорт, разнообразие и экономия времени 2024-01-14
- Все что нужно знать о покупке земли 2024-01-14
- NATO-УГРОЗА СТАБИЛЬНОСТИ И БЕЗОПАСНОСТИ УКРАИНЫ 2023-12-05
- Займ Бесплатно на Карту Онлайн. Финансовая Гибкость и Удобство в Одном Клике 2023-11-30
- Преимущества краткосрочного займа на карту 2023-11-27
- Украине уже пора снять розовые очки и оценить, что значит война, нацизм и терроризм 2023-11-03
- юрии 0000-00-00
- Понимание основ охраны труда 2023-10-11
Картинка недели
Указы СССР 1917-1992
Категории
Методические указания по определению диазинона и фосфамида в биологических средах методами тонкослойной и газожидкостной хроматографии
Дата публикации: До 2014-05-28Просмотров: 661
Материал приурочен к дате: 1987-06-08
Прочие материалы относящиеся к: Дате 1987-06-08 Материалы за: Год 1987
Автор: Мета Гость
Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1987 г. N 4323-87 (фосфамид),
N 4324-87 (диазинон)
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИАЗИНОНА И ФОСФАМИДА В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ
МЕТОДАМИ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Краткая характеристика препаратов диазинон и фосфамид приведена в Унифицированной методике.
Принцип метода. Метод основан на экстракции диазинона и фосфамида из биологических сред органическими растворителями (хлороформ, ацетон), очистке полученных экстрактов и последующем определении методами ТСХ и ГЖХ.
Метод ТСХ предусматривает использование подвижной фазы на основе гексана, проявляющих реагентов - бромфенолового синего, хлорида палладия, 2,6-дибром-N-хлорхинонимина, нитрата серебра.
Метод ГЖХ предусматривает применение ТИД и ДЭЗ, неподвижных фаз SE-30 или XE-60.
Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 34.
Таблица 34
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИАЗИНОНА
И ФОСФАМИДА В БИОСРЕДАХ (N = 5 И P = 0,95)
┌───────────────────┬─────────────┬────────────┬───────────┬─────────────┬─────┐
│ Анализируемый │Нижний предел│ Среднее │Стандартное│Доверительный│Метод│
│ объект │определения, │ значение │отклонение,│ интервал, │ │
│ │ мкг/мл, │определения,│ % │ % │ │
│ │ мкг/г, │ % │ │ │ │
│ │ мкг/кв. см │ │ │ │ │
├───────────────────┴─────────────┴────────────┴───────────┴─────────────┴─────┤
│ Диазинон │
│ │
│Желудочный сок, │0,05 │85,4 │+/- 3,9 │+/- 4,9 │ГЖХ │
│слюна │0,25 │78,5 │+/- 6,3 │+/- 7,8 │ТСХ │
│Желчь │0,05 │87,2 │+/- 4,1 │+/- 5,1 │ГЖХ │
│ │0,25 │80,0 │+/- 6,3 │+/- 7,8 │ТСХ │
│Моча │0,002 │95,3 │+/- 4,7 │+/- 5,8 │ГЖХ │
│ │0,05 │89,5 │+/- 6,8 │+/- 8,5 │ТСХ │
│Кровь │0,05 │90,3 │+/- 3,5 │+/- 4,3 │ГЖХ │
│ │0,25 │82,4 │+/- 7,3 │+/- 9,1 │ТСХ │
│Ткани внутренних │0,02 │91,7 │+/- 4,7 │+/- 5,8 │ГЖХ │
│органов, кожа │0,5 │88,5 │+/- 7,6 │+/- 9,5 │ТСХ │
│Смывы с поверхности│0,002 │95,6 │+/- 3,7 │+/- 4,6 │ГЖХ │
│кожи │0,31 │90,0 │+/- 8,4 │+/- 10,5 │ТСХ │
│ │
│ Фосфамид │
│ │
│Желудочный сок, │0,02 │88,6 │+/- 3,85 │+/- 4,8 │ГЖХ │
│слюна │0,25 │78,6 │+/- 6,3 │+/- 7,8 │ТСХ │
│Желчь │0,02 │92,0 │+/- 3,4 │+/- 4,2 │ГЖХ │
│ │0,25 │82,0 │+/- 7,4 │+/- 9,2 │ТСХ │
│Кровь │0,02 │95,2 │+/- 2,8 │+/- 6,0 │ГЖХ │
│ │0,25 │85,2 │+/- 6,8 │+/- 8,5 │ТСХ │
│Моча │0,0008 │95,1 │+/- 3,7 │+/- 4,6 │ГЖХ │
│ │0,01 │89,1 │+/- 6,7 │+/- 8,3 │ТСХ │
│Кожа │0,04 │91,1 │+/- 4,5 │+/- 5,6 │ГЖХ │
│ │0,5 │87,9 │+/- 7,6 │+/- 9,4 │ТСХ │
│Ткани внутренних │0,04 │90,3 │+/- 4,9 │+/- 6,1 │ГЖХ │
│органов │0,5 │80,3 │+/- 7,2 │+/- 8,9 │ТСХ │
│Смывы с поверхности│0,006 │95,2 │+/- 3,5 │+/- 4,3 │ГЖХ │
│кожи │0,03 │90,0 │+/- 7,2 │+/- 8,9 │ТСХ │
└───────────────────┴─────────────┴────────────┴───────────┴─────────────┴─────┘
Избирательность метода. Определению диазинона и фосфамида не мешают пестициды, которые могут присутствовать в пробе: циклоат, эптам, метоксихлор, линдан.
Реактивы и растворы. Диазинон х.ч. или препаративная форма. Фосфамид х.ч. или 40(38)-процентный к.э. Ацетон х.ч. Гексан ч. Хлороформ х.ч. Натрия цитрат ч. Натрия сульфат безводный ч.д.а. Серебра нитрат х.ч., 0,5-процентный водно-ацетоновый раствор (1:3). Гидроксид натрия х.ч., 20-процентный раствор. Бромфеноловый синий ч.д.а. Кислота лимонная х.ч., 2-процентный раствор. Кислота хлороводородная х.ч., концентрированная и 0,1 н раствор. Хлорид палладия ч. Кальция сульфат безводный х.ч.
Проявляющие реагенты: N 1 - бромфеноловый синий (взвешивают 50 мг бромфенолового синего, растворяют в 10 мл ацетона и далее разбавляют до 100 мл раствором нитрата серебра. Срок хранения в холодильнике 1 мес.); N 2 - хлорид палладия (взвешивают 0,2 г хлорида палладия, вносят в колбу вместимостью 100 мл, приливают 2 капли концентрированной хлороводородной кислоты, помещают колбу в водяную баню при 60 - 70 °C на 10 - 15 мин. Периодически встряхивают до полного растворения содержимого колбы. Доводят объем раствора до 100 мл водой. Срок хранения реактива в холодильнике 1 мес.); N 3 - 2,6-дибром-N-хлорхинонимин х.ч., 0,5-процентный раствор в гексанеN 4 - нитрат серебра (взвешивают 1 г нитрата серебра и растворяют в 99 мл воды. Опрыскивают пластинки проявляющим реагентом N 4 после гидролиза 20-процентным раствором гидроксида натрия. Хранят реактив в холодильнике до 2 недель).
Для определения фосфамида подвижная фаза: хлороформ - ацетон - гексан (3:1:1) или гексан - ацетон (3:2), для определения диазинона - гексан - ацетон (2:1 или 3:1).
Стандартный раствор фосфамида, диазинона с содержанием 100; 10; 2 и 0,2 мкг/мл в гексане или ацетоне для ГЖХ, 100 мкг/мл в хлороформе - для ТСХ. Если стандартный раствор готовят из препаративной формы пестицида, то учитывают содержание действующего вещества, при необходимости фильтруют. Срок хранения стандартных растворов, содержащих 100 мкг/мл, до 1 мес. в холодильнике.
Азот, водород в баллонах с редукторами. Азот особой чистоты (содержание кислорода не более 0,003%).
Насадка хроматографической колонки: при использовании ТИД - хроматон N-AW-DMCS + 5% SE-30 (анализ фосфамида), хроматон N-AW-DMCS + 5% XE-60 (анализ диазинона); при использовании ДЭЗ или ДПР - хроматон N-AW-DMCS + 5% XE-60 (0,16 - 0,20 мм).
Оксид алюминия II степени активности для хроматографии. Сульфат кальция безводный ч.д.а.
Хроматографические пластинки "Силуфол" размером 15 x 15 см. Для приготовления хроматографических пластинок с оксидом алюминия 50 г оксида алюминия, просеянного через сито 100 меш, смешивают с 5 г безводного сульфата кальция и 75 мл воды, встряхивают до образования однородной массы; наносят тонким слоем на 10 стеклянных пластинок размером 9 x 12 см; сушат на воздухе 12 ч; хранят в эксикаторе.
Приборы и посуда. Газовый хроматограф с ТИД, ДЭЗ или ДПР. Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М с набором колб или аналогичный аппарат для отгонки растворителей. Аппарат для встряхивания. Термостат. Колбы мерные, цилиндры. Пипетки, микропипетки. Воронки химические и делительные. Хроматографическая камера. Камера для опрыскивания пластинок. Пульверизатор стеклянный. Баня водяная. Стеклянные капилляры для нанесения проб на хроматографические пластинки. Стеклянные пластинки размером 9 x 12 см. Микрошприц МШ-10. Колонки стеклянные хроматографические длиной 1 м с внутренним диаметром 3 мм. Секундомер. Линейка измерительная. Лупа измерительная.
Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. К 2 мл пробы слюны, желчи, желудочного сока приливают 0,5 мл воды, 3 мл хлороформа и осторожно встряхивают на холоде 30 мин. Отделяют органический слой. Экстракцию проводят еще дважды порциями растворителя по 3 мл. Экстракты объединяют, пропускают через слой безводного сульфата натрия (2 г), фильтруют. Отгоняют растворитель примерно до объема 0,2 - 0,5 мл.
К 50 мл мочи приливают 5 мл воды, 10 мл хлороформа и экстрагируют, осторожно встряхивая в течение 30 мин. Экстракцию проводят трижды порциями хлороформа по 10 - 20 мл. Органический слой отделяют, объединяют и далее поступают так же, как с пробами слюны.
Пробу крови (2 мл) отбирают в пробирку, смоченную 5-процентным раствором цитрата натрия. Приливают 4 мл хлороформа и осторожно встряхивают на холоде 20 мин. Органический слой отделяют, фильтруют, пропускают через безводный сульфат натрия. Экстракцию проводят дважды порциями растворителя по 4 мл. Далее поступают так же, как с пробами слюны.
Пробу кожи, тканей внутренних органов предварительно выдерживают в морозильнике 1 - 2 ч. Пробу массой 1 г тщательно измельчают, растирают в фарфоровой ступке, приливают 4 мл охлажденного ацетона и содержимое переносят в склянку с притертой пробкой. Встряхивают на холоде в течение 30 - 40 мин. Органический слой сливают, фильтруя через безводный сульфат натрия. Экстракцию повторяют еще дважды свежими порциями ацетона. Объединенный экстракт переносят в колбу для отгонки растворителей и отгоняют ацетон примерно до объема 0,2 - 0,5 мл. Остаток раствора подсушивают безводным сульфатом натрия.
Анализ методом ТСХ. Пробу 0,2 - 0,5 мл количественно наносят на хроматографическую пластинку, параллельно на эту же пластинку наносят стандартные растворы пестицида, содержащие 0,5 - 10 мкг. Помещают пластинку в хроматографическую камеру, куда предварительно (за 20 - 30 мин.) наливают подвижную фазу. После поднятия фронта растворителя на высоту 10 - 12 см пластинку извлекают из камеры и дают улетучиться следам растворителя. Затем применяют один из проявляющих реагентов. Если хроматографирование проводят на пластинках "Силуфол", то используют проявляющие реагенты N 1, 2, 3 (диазинон, фосфамид).
Через 15 - 20 мин. после опрыскивания пластинки проявляющим реагентом N 1 ее опрыскивают 5-процентным раствором лимонной кислоты. Пестициды и некоторые метаболиты окрашиваются в синий, темно-голубой, сине-зеленый цвет на светло-желтом фоне пластинки. Если применяют проявляющий реагент N 2, то сразу после опрыскивания фосфамид окрашивается в светло-коричневый цвет, иногда с желтоватым оттенком, а диазинон - в желтый цвет.
После опрыскивания проявляющим реагентом N 3 пластинку следует поместить в сушильный шкаф при 110 - 115 °C на 2 - 3 мин. На светлом фоне пластинки зоны локализации пестицидов и их фосфорорганических аналогов окрашиваются в ярко-красный и рубиново-желтый цвета соответственно, а других метаболитов - в розово-красный цвет.
Величина R фосфамида 0,55 - 0,6; кислородного аналога (P-O)
f
фосфамида - 0,2 - 0,25. Величина R диазинона - 0,45; его
f
метаболитов: диазоксона (P-O-диазинона) - 0,3; 2-изопропил-N-
метил-6-гидроксипиримидина - 0,1; 2-изопропил-6-
меркаптопиримидина - 0,6; тетраэтилпирофосфата - 0,7.
Если хроматографирование проб, содержащих фосфамид, проводят
на пластинках с оксидом алюминия с использованием в качестве
подвижного растворителя хлороформа, то применяют проявляющий
реагент N 4. После улетучивания следов хлороформа пластинку
обрабатывают 20-процентным раствором гидроксида натрия, а после
подсушивания слоя - проявляющим реагентом N 4. Пластинку помещают
в сушильный шкаф при 105 °C на 5 мин.; фосфамид и его кислородный
аналог проявляют в виде серо-черных пятен. Величина R фосфамида
f
0,4кислородного аналога - 0,1 - 0,15.
Анализ методом ГЖХ. Экстракцию диазинона и фосфамида из биологических проб (желчь, желудочный сок, кровь, моча, кожа, ткани внутренних органов) проводят так же, как для определения методом ТСХ. Полученные экстракты при комнатной температуре упаривают до сухого остатка. К сухому остатку приливают 1 мл гексана или ацетона и аликвотную часть пробы (2 - 5 мкл) вводят в хроматограф (табл. 35).
Таблица 35
УСЛОВИЯ ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
┌──────────────────────────┬───────────────────────┬──────────────────────┐
│ Характеристики │ ТИД │ ДЭЗ │
├──────────────────────────┼───────────────────────┼──────────────────────┤
│Насадка │Хроматон + 5% SE-30 │Хроматон + 5% XE-60 │
│ │(фосфамид) │ │
│ │Хроматон + 5% XE-60 │ │
│ │(диазинон) │ │
│Температура, °C: │ │ │
│ колонки │180 │180 │
│ испарителя │230 │220 - 230 │
│ детектора │- │190 │
│Расход, мл/мин. │ │ │
│ азота │20 - 25 │40 - 60 │
│ │ │(азот особой чистоты) │
│ водорода │20 │- │
│ воздуха │200 - 240 │240 (для ДПР) │
│ │ -12 │ -12 │
│Чувствительность шкалы │50 x 10 │(20...50) x 10 │
│электрометра, А │ │ │
│Минимально детектируемое │0,2 │0,5 (фосфамид), │
│количество, нг │ │2 (диазинон) │
└──────────────────────────┴───────────────────────┴──────────────────────┘
Примечание. Режим работы изотермический. Длина колонки 1 м, диаметр 3 мм. Время выхода, мин.: фосфамида 2,1 - 4,8; фосфорорганического аналога фосфамида 1,5 - 5,6; диазинона 1,5 - 2,8; диазоксона - 3,1.
Обработка результатов анализа. Анализ методом ТСХ. С помощью промасленной миллиметровой бумаги измеряют площадь пятен пестицида на хроматограмме пробы и стандартных растворов. Можно построить градуировочный график зависимости площади пятна от концентрации и по графику найти концентрацию фосфамида в хроматографируемой пробе. Для расчета можно использовать формулу. Измеряют площадь того пятна на хроматограмме стандарта, которое по размерам наиболее близко к пятну на хроматограмме пробы.
Анализ методом ГЖХ. Количественную обработку результатов анализа проводят методом абсолютной калибровки. Для этого строят градуировочный график зависимости площади от концентрации, вводя в хроматограф по 2 - 5 мкл стандартных растворов фосфамида и диазинона, содержащих 0,2 - 20 мкг/мл. По градуировочному графику находят концентрацию пестицидов в хроматографируемой пробе. При анализе проб параллельное определение проводят не менее трех раз. Для расчета можно воспользоваться формулой, измерив площадь пика на хроматограмме стандарта, наиболее близкого по размерам к пику на хроматограмме пробы, и полученные величины подставить в формулу.
Расчет количества пестицидов в пробе (X, мкг/г, мкг/мл) проводят по формуле:
CS V
пр
X = ------,
S V P
ст 1
где:
C - количество пестицида на хроматограмме стандарта, мкг;
S - площадь пятна (ТСХ) или пика (ГЖХ) на хроматограмме
ст
стандарта, кв. мм;
S - площадь пика (ГЖХ) или пятна (ТСХ) на хроматограмме
пр
пробы, кв. мм;
V - общий объем экстракта пробы, мл;
V - хроматографируемый объем экстракта пробы, мл;
1
P - навеска или объем пробы, г или мл.
Требования безопасности. Необходимо соблюдать правила безопасности при работе в химической лаборатории с ядовитыми веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
Остальные материалы раздела: Указы СССР 1917-1992
Предыдущая Методические указания по определению сумилекса в биологических средах методом газожидкостной хроматографии утв. Минздравом СССР 08.06.1987 N 4Следующая Методические указания по определению гоала в почве. эфиромасличных растениях и эфирных маслах методом газожидкостной хроматографии утв.