Путь:
Навигация
- Декреты СССР 1917-1992
- Законы СССР 1917-1992
- Инструкции СССР 1917-1992
- Обращения СССР 1917-1992
- Письма СССР 1917-1992
- Положения СССР 1917-1992
- Постановления СССР 1917-1992
- Правила СССР 1917-1992
- Приказы СССР 1917-1992
- Прочие СССР 1917-1992
- Распоряжения СССР 1917-1992
- Указы СССР 1917-1992
- Циркуляры СССР 1917-1992
Язык [ РУССКИЙ ]
Новые материалы
- Геноцид собственного народа или зеленская чума 21 века 2024-04-27
- Бизнес-ланч как организовать обед с выгодой 2024-03-23
- Болезни, которые успешно лечатся в современных клиниках 2024-03-10
- Пополнить Steam Пополнение Счета через Steam 2024-03-05
- 10 способов оптимизации пространства в маленькой ванной 2024-02-03
- Магия звука выберите подходящий музыкальный инструмент для вашего творчества 2024-01-22
- Куда можно поехать отдохнуть в России 2024-01-22
- Преимущества доставки еды комфорт, разнообразие и экономия времени 2024-01-14
- Все что нужно знать о покупке земли 2024-01-14
- NATO-УГРОЗА СТАБИЛЬНОСТИ И БЕЗОПАСНОСТИ УКРАИНЫ 2023-12-05
- Займ Бесплатно на Карту Онлайн. Финансовая Гибкость и Удобство в Одном Клике 2023-11-30
- Преимущества краткосрочного займа на карту 2023-11-27
- Украине уже пора снять розовые очки и оценить, что значит война, нацизм и терроризм 2023-11-03
- юрии 0000-00-00
- Понимание основ охраны труда 2023-10-11
Картинка недели
Указы СССР 1917-1992
Категории
Методические указания по определению нитрапирина и его метаболита 6-хлорпиколиновой кислоты в воде, почве и биологическом материале метод
Дата публикации: До 2014-05-28Просмотров: 671
Материал приурочен к дате: 1987-06-08
Прочие материалы относящиеся к: Дате 1987-06-08 Материалы за: Год 1987
Автор: Мета Гость
Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1987 г. N 4360-87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НИТРАПИРИНА И ЕГО МЕТАБОЛИТА
6-ХЛОРПИКОЛИНОВОЙ КИСЛОТЫ В ВОДЕ, ПОЧВЕ И БИОЛОГИЧЕСКОМ
МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Краткая характеристика препарата. Нитрапирин - 2-хлор-6-
(трихлорметил)пиридин. Брутто-формула C H Cl N. Молекулярная
6 3 4
масса 230,9. Общепринятое название - н-серве. Химически чистое
вещество - кристаллический порошок со слабым сладковатым запахом.
Температура воспламенения более 350 °C, т. пл. 62 - 63 °C.
Давление пара при 25 °C составляет 0,37 Па. Нитрапирин хорошо
растворим в хлороформе, ацетоне, безводном аммиаке, хлористом
метилене, ксилоле при 20 - 26 °C. Растворимость в воде менее 40
мг/л. Рекомендован для применения в качестве стабилизатора азотных
удобрений.
Основной продукт превращения нитрапирина в объектах окружающей
среды и животном организме - 6-хлорпиколиновая кислота (6-ХПК).
Брутто-формула C H O ClN. Молекулярная масса 157,5. Химически
6 4 2
чистое вещество - белый кристаллический порошок, хорошо
растворимый в этилацетате, ацетоне, малорастворимый в хлороформе,
диэтиловом эфире, этаноле, бензоле, воде. МДУ нитрапирина и 6-ХПК
в овощных и зерновых культурах 0,4 мг/кг; ПДК в воде 0,02 мг/л.
Принцип метода. Метод основан на извлечении исследуемых
соединений из пробы органическим растворителем, очистке
экстрактов, хроматографировании в тонком слое пластинок "Силуфол"
УФ и обнаружении препаратов раствором аммиаката серебра,
254
подвергнутых УФ-облучению до и после проявления.
Метрологическая характеристика метода. Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 151.
Таблица 151
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ
НИТРАПИРИНА И ЕГО МЕТАБОЛИТА 6-ХПК В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ
СРЕДЫ И БИОМАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ
┌─────────────┬─────────────┬──────────────┬─────────────┬────────────────┐
│Анализируемый│ Предел │ Среднее │ Стандартное │Доверительный │
│ объект │определения, │ значение │отклонение, %│ интервал при │
│ │мг/л, мг/кг, │определения, %│ │n = 5, p = 0,95,│
│ │мкг/г, мкг/мл│ │ │ % │
├─────────────┴─────────────┴──────────────┴─────────────┴────────────────┤
│ Нитрапирин │
│ │
│Вода │0,005 │94,00 │+/- 4,60 │+/- 5,72 │
│Почва │0,02 │84,10 │+/- 1,97 │+/- 2,44 │
│Картофель │0,02 │86,40 │+/- 1,84 │+/- 2,28 │
│Свекла │0,02 │84,40 │+/- 0,90 │+/- 1,12 │
│Зерно │0,02 │82,00 │+/- 1,58 │+/- 1,96 │
│Печень │0,2 │90,40 │+/- 5,71 │+/- 7,10 │
│Почки │0,2 │89,86 │+/- 6,62 │+/- 8,23 │
│Легкие │0,2 │93,90 │+/- 4,34 │+/- 5,39 │
│Мозг │0,2 │87,66 │+/- 5,21 │+/- 6,48 │
│Кал │0,2 │88,40 │+/- 8,52 │+/- 10,60 │
│Кровь │0,2 │87,46 │+/- 6,48 │+/- 8,06 │
│Моча │0,1 │96,00 │+/- 5,47 │+/- 6,80 │
│ │
│ 6-ХПК │
│ │
│Вода │0,005 │89,0 │+/- 1,57 │+/- 1,97 │
│Почва │0,2 │83,0 │+/- 3,00 │+/- 3,72 │
│Зерно │0,2 │82,0 │+/- 2,75 │+/- 3,34 │
│Зеленая масса│0,3 │80,0 │+/- 3,03 │+/- 3,78 │
│Печень │0,1 │87,6 │+/- 3,29 │+/- 4,08 │
│Почки │0,1 │86,0 │+/- 1,58 │+/- 1,96 │
│Легкие │0,1 │88,0 │+/- 3,87 │+/- 4,80 │
│Мозг │0,2 │83,0 │+/- 3,00 │+/- 3,72 │
│Кал │0,2 │85,4 │+/- 3,64 │+/- 4,51 │
│Кровь │0,1 │94,0 │+/- 3,08 │+/- 3,82 │
│Моча │0,1 │91,2 │+/- 0,84 │+/- 1,04 │
└─────────────┴─────────────┴──────────────┴─────────────┴────────────────┘
Избирательность метода. В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии ХОП, а также таких близких по структуре и области применения соединений, как 2М-4Х, 2,4-Д, бенлат, БМК, хлорамп.
Реактивы и материалы. Ацетон ч.д.а. Этилацетат х.ч. Бензол
х.ч. н-Гексан ч. Этиловый эфир медицинский. Хлорид калия х.ч.,
24-процентный раствор, приготовленный на 0,5-процентном растворе
едкого натра. Едкий натр х.ч., 0,5-процентный в.р. Серная кислота
х.ч., 0,2-процентный и 10-процентный (по объему) в.р. Уксусная
кислота х.ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Нитрат серебра х.ч.
Аммиак водный ч.д.а. Пластинки хроматографические "Силуфол" УФ .
254
Фильтры бумажные "синяя лента". Ортофосфорная кислота х.ч.,
2-процентный (по объему) водный раствор, предварительно насыщенный
хлоридом калия. Уголь активированный марки БАУ. Мета-кремнекислый
магний ч. Стандартный раствор нитрапирина в ацетоне с содержанием
100 мкг/мл. Стандартный раствор 6-ХПК в этилацетате с содержанием
100 мкг/мл. Растворы нитрапирина и 6-ХПК хранят в сухом прохладном
месте не более 15 дней. Ацетонитрил ч.
Приборы, аппаратура, посуда. Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4. Ротационный испаритель. Водоструйный насос. Воронки: Бюхнера; делительные на 100, 500 мл. Колбы: Бунзенакруглодонные короткогорлые со шлифом N 29 на 100, 250 мл; конические на 100, 250 мл; мерные на 25, 100 мл. Камера для хроматографирования. Камера для опрыскивания. Пипетки с делениями на 2, 5, 10 мл. Микропипетки на 0,1 мл. Пульверизаторы стеклянные. Стаканы химические на 50, 100, 250 мл.
Подготовка к определению. Приготовление проявляющих реагентов: N 1 - 0,5 г нитрата серебра помещают в мерную колбу на 100 мл, растворяют в нескольких миллилитрах ацетона, добавляют 5 мл аммиака и 5 мл дистиллированной воды. Содержимое колбы перемешивают, доводят уровень раствора до метки ацетоном. Раствор хранят в темной склянке не более 10 дней; N 2 - 0,85 г нитрата серебра помещают в мерную колбу на 100 мл и дважды растворяют в нескольких миллилитрах дистиллированной воды, прибавляют 2,5 мл концентрированного аммиака. Содержимое колбы перемешивают, доводят уровень раствора до метки дистиллированной водой. Реагент хранят в темной склянке не более 3 мес.
Подготовка хроматографической колонки с чередующимися слоями кремнекислого мета-магния и безводного сульфата натрия. В хроматографическую колонку (длина 400 мм, диаметр 20 мм) помещают стекловату и насыпают безводный сульфат натрия высотой 2,5 см. Затем насыпают слой в 7,5 см мета-кремнекислого магния (активированного при 650 °C в течение 4 ч) и слегка уплотняют стеклянной палочкой. Затем вновь чередуют слой безводного сульфата натрия (2,5 см) и мета-кремнекислого магния (7,5 см) и снова уплотняют. В верхнюю часть колонки на высоту 2,5 см насыпают слой безводного сульфата натрия. Смачивают колонку 40 мл гексана и помещают под нее коническую колбу на 100 мл для сбора вытекающей из колонки жидкости.
Отбор проб. Пробы транспортируют в стеклянной таре с притертыми пробками. Анализы проводят в дни отбора проб.
Ход анализа. Определение нитрапирина. Экстракция и очистка. Пробу воды (100 мл) помещают в делительную воронку и экстрагируют нитрапирин трижды хлороформом порциями по 30 мл. Объединенный экстракт проводят через воронку с безводным сульфатом натрия и отгоняют растворитель на ротационном испарителе досуха при температуре не более 35 °C.
Навеску почвы в 50 г помещают в плоскодонную колбу и смешивают с 5 г безводного сульфата натрия. Экстракцию проводят 100 мл смеси гексан - ацетон (1:1). Экстракт отфильтровывают в делительную воронку через фильтр "синяя лента", промывают 150 мл 2-процентного водного раствора сульфата натрия и встряхивают. После разделения гексановый слой переносят в круглодонную колбу со шлифом через воронку с 2 - 3 г безводного сульфата натрия. Растворитель отгоняют на роторном испарителе при температуре 35 °C.
Образец картофеля или свеклы в 50 г измельчают, помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, добавляют 5 г безводного сульфата натрия и смешивают. Препарат извлекают дробными экстракциями (50, 30, 30 мл) при интенсивном встряхивании с гексаном. Объединенные экстракты промывают в делительной воронке 30 мл дистиллированной воды. Водный слой отбрасывают, а гексановый слой отфильтровывают через фильтр "синяя лента" с 2 - 3 г безводного сульфата натрия в круглодонную колбу со шлифом. Растворитель отгоняют на роторном испарителе при температуре 35 °C.
Пробу зерна крупного помола в 50 г помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, заливают 50 мл гексана и интенсивно встряхивают в течение 30 мин., затем проводят еще дважды, экстрагируют гексаном порциями по 30 мл. Объединенные экстракты отфильтровывают в круглодонную колбу и отгоняют растворитель на роторном испарителе при 35 °C. Сухой остаток растворяют в 10 мл этилового эфира, вливают в колонку для хроматографирования в тот момент, когда мениск ранее введенного гексана достигнет верхней части адсорбента. Затем колбу обмывают 10 мл этилового эфира и также вводят в колонку. Элюируют нитрапирин из колонки смесью гексана с этиловым эфиром (2:1). Собранные в приемник первые 60 мл элюата отбрасывают, а содержащие препарат последующие 40 мл собирают в круглодонную колбу со шлифом. Растворитель отгоняют на роторном испарителе при температуре 35 °C.
Экстракцию из биосубстратов экспериментальных животных проводят следующим образом. Пробу крови, мочи (5 мл) трижды экстрагируют хлороформом порциями по 10 мл. Объединенные экстракты высушивают безводным сульфатом натрия и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре 35 °C досуха. Остаток с помощью ацетона наносят на хроматографическую пластинку и хроматографируют.
Пробу печени, мозга, легких, почек, кала (5 г) тщательно измельчают, помещают в коническую колбу на 100 мл, добавляют 10 мл ацетонитрила, смешивают стеклянной палочкой и экстрагируют. Экстракцию повторяют еще дважды ацетонитрилом порциями по 10 мл. Экстракты проводят через воронку с безводным сульфатом натрия. Объединенные экстракты очищают встряхиванием с гексаном 3 раза по 10 мл. Гексановые экстракты сливают, а ацетонитрильные упаривают на ротационном испарителе при температуре 35 °C досуха. Остаток с помощью ацетона наносят на хроматографическую пластинку и хроматографируют.
Хроматографирование и проявление хроматограмм с пробами
нитрапирина. Сухой остаток после удаления растворителя растворяют
в ацетоне и наносят на пластинку "Силуфол" УФ . Пластинку с
254
нанесенными пробами и стандартными растворами помещают в камеру с
подвижной системой гексан - ацетон (5:1). После поднятия фронта
растворителей на 12 см пластинку вынимают из камеры, подсушивают и
опрыскивают 5 мл проявляющего реагента N 1 и подвергают
УФ-облучению в течение 10 мин. Нитрапирин проявляется в виде
темно-серых пятен с R 0,77 +/- 0,02 на светло-коричневом фоне.
f
Обработка результатов анализа. Количественная оценка проводится сравнением площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартного раствора. Содержание нитрапирина в пробе (X, мг/кг, мг/л или мкг/г, а в случае биосубстратов - мкг/мл) вычисляют по формуле:
A
X = -,
P
где:
A - количество вещества, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;
P - масса или объем анализируемой пробы, г или мл.
Определение 6-ХПК. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды 200 мл помещают в делительную воронку, подкисляют 1,5 - 2 мл 10-процентного раствора серной кислоты (до pH 1 - 2) и трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 50 мл. Остаток количественно наносят на хроматографическую пластинку после упаривания на ротационном испарителе при температуре 55 - 60 °C.
Навеску почвы (50 г), измельченной и просеянной, подкисляют 20 мл 2-процентной ортофосфорной или 0,2-процентным раствором серной кислоты и трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 50 мл. Растворитель фильтруют через воронку Бюхнера, отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре 55 - 60 °C. К сухому остатку прибавляют 10 - 15 мл 20-процентного раствора хлорида калия, приготовленного на 0,5-процентном растворе едкого натра, колбу тщательно ополаскивают и переносят в делительную воронку. Колбу еще раз промывают 10 - 15 мл того же раствора щелочи и сливают в ту же воронку. Объединенный щелочной экстракт промывают дважды по 10 - 15 мл гексана. Гексановые экстракты отбрасывают, а щелочной раствор подкисляют 10-процентным раствором серной кислоты до pH 1 - 2 и трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 15 - 20 мл. Объединенный экстракт проводят через воронку с безводным сульфатом натрия, растворитель отгоняют при температуре 55 - 60 °C, остаток наносят на хроматографическую пластинку.
Пробу 25 г растительного материала (зерновые, зеленая масса) помещают в колбу и приливают 15 - 20 мл 2-процентного раствора ортофосфорной или 0,2-процентного раствора серной кислоты, предварительно насыщенного хлоридом калия, и экстрагируют 6-ХПК трижды по 50 мл этилацетатом. Растворитель фильтруют через воронку Бюхнера и отгоняют досуха на ротационном испарителе при температуре 55 - 60 °C. Далее поступают аналогично анализу почвы.
Очистка экстрактов в случае сильного загрязнения пигментами. Если после первой экстракции этилацетатом экстракты сильно загрязнены пигментами, то очистку можно проводить следующим образом. В случае зеленой массы к сухому остатку прибавляют 15 - 20 мл 20-процентного раствора хлорида калия, приготовленного на 0,5-процентном растворе едкого натра. Содержимое колбы тщательно перемешивают. В колбу при перемешивании прибавляют смесь, полученную в результате энергичного встряхивания 2 г активированного угля марки БАУ, 15 мл 0,5-процентного раствора едкого натра и 15 мл гексана. Пробу выдерживают 1 ч, периодически встряхивая, и фильтруют через воронку Бюхнера. Колбу и уголь на фильтре промывают дважды 0,5-процентным раствором едкого натра по 10 мл. Смесь переносят в делительную воронку, гексановый слой отбрасывают. К водному слою прибавляют 1 - 2 мл 10-процентного раствора серной кислоты (pH 1 - 2) и трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 20 - 30 мл. Объединенные экстракты высушивают, растворитель отгоняют при 55 - 60 °C, остаток наносят на хроматографическую пластинку.
Пробу биосубстратов экспериментальных животных (кровь, моча, печень, почки, легкие, мозг, кал) 5 г или 5 мл помещают в колбу и трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 10 - 15 мл. Растворитель отфильтровывают через бумажный фильтр в колбу для выпаривания и отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре 55 - 60 °C. Далее поступают аналогично анализу почвы.
Хроматографирование и проявление хроматограмм с пробами 6-ХПК.
После отгонки растворителя пробы с помощью этилацетата
количественно наносят на пластинки "Силуфол" на расстоянии 1 см от
нижнего края пластинки (размеры пластинки 15 x 15 см). Сначала
хроматографирование проводят в бензоле. При этом 6-ХПК остается на
старте, а примеси, содержащиеся в пробе, продвигаются вверх. После
подсушивания пластинок на воздухе (под вытяжкой) проводят
вторичное хроматографирование в смеси бензол - уксусная кислота
(1:1). После хроматографирования пластинки ее высушивают и
выдерживают под ртутно-кварцевой лампой 7 - 10 мин. Далее
пластинку опрыскивают проявляющим реагентом N 2 и снова подвергают
УФ-облучению до четкого проявления пятен (примерно 5 мин.). При
наличии в пробе 6-ХПК на пластинке проявляются пятна бурого цвета
с величиной R 0,54 +/- 0,01.
f
Обработка результатов анализа. Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартного раствора. Содержание 6-ХПК в анализируемой пробе (X, мг/кг, мг/л, а в случае биосубстратов - мкг/г, мкг/мл) определяют по формуле:
A
X = -,
P
где:
A - количество 6-ХПК, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;
P - масса или объем анализируемой пробы, г или мл.
Требования безопасности. При работе с нитрапирином и 6-ХПК необходимо беречь глаза, а также соблюдать все необходимые меры предосторожности при работе в химических лабораториях и правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены.
Остальные материалы раздела: Указы СССР 1917-1992
Предыдущая Методические указания по измерению концентраций 1-карбамоил-35-метилпиразола и 35-метилпиразола в воздухе при их совместном присутствии метСледующая Методические указания по систематическому ходу анализа биологических сред на содержание пестицидов различной химической природы утв. Ми