Путь:
Навигация
- Декреты СССР 1917-1992
- Законы СССР 1917-1992
- Инструкции СССР 1917-1992
- Обращения СССР 1917-1992
- Письма СССР 1917-1992
- Положения СССР 1917-1992
- Постановления СССР 1917-1992
- Правила СССР 1917-1992
- Приказы СССР 1917-1992
- Прочие СССР 1917-1992
- Распоряжения СССР 1917-1992
- Указы СССР 1917-1992
- Циркуляры СССР 1917-1992
Язык [ РУССКИЙ ]
Новые материалы
- Геноцид собственного народа или зеленская чума 21 века 2024-04-27
- Бизнес-ланч как организовать обед с выгодой 2024-03-23
- Болезни, которые успешно лечатся в современных клиниках 2024-03-10
- Пополнить Steam Пополнение Счета через Steam 2024-03-05
- 10 способов оптимизации пространства в маленькой ванной 2024-02-03
- Магия звука выберите подходящий музыкальный инструмент для вашего творчества 2024-01-22
- Куда можно поехать отдохнуть в России 2024-01-22
- Преимущества доставки еды комфорт, разнообразие и экономия времени 2024-01-14
- Все что нужно знать о покупке земли 2024-01-14
- NATO-УГРОЗА СТАБИЛЬНОСТИ И БЕЗОПАСНОСТИ УКРАИНЫ 2023-12-05
- Займ Бесплатно на Карту Онлайн. Финансовая Гибкость и Удобство в Одном Клике 2023-11-30
- Преимущества краткосрочного займа на карту 2023-11-27
- Украине уже пора снять розовые очки и оценить, что значит война, нацизм и терроризм 2023-11-03
- юрии 0000-00-00
- Понимание основ охраны труда 2023-10-11
Картинка недели
Указы СССР 1917-1992
Категории
Методические указания по групповой идентификации хлорорганических пестицидов и их метаболитов в биоматериале, продуктах питания и объек
Дата публикации: До 2014-05-28Просмотров: 671
Материал приурочен к дате: 1991-07-29
Прочие материалы относящиеся к: Дате 1991-07-29 Материалы за: Год 1991
Автор: Мета Гость
Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6129-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ГРУППОВОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ
И ИХ МЕТАБОЛИТОВ В БИОМАТЕРИАЛЕ, ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ
И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ МЕТОДОМ АДСОРБЦИОННОЙ
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая характеристика препаратов
Краткие характеристики действующих веществ хлорорганических пестицидов (4,4'-ДДТ и его производные, альдрин, ГПХ, ГПХЭ, даконил, дилор, кельтан, ПХП) и их метаболитов (полихлорфенолы и полихлорбензолы) приведены в книгах: "Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде", М., Колос, 1977, 368 с.; Клисенко М.А., Александрова Л.Г. "Определение остаточных количеств пестицидов", Киев, Здоровье, 1983, 248 с.; "Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде", ч. 1, М., 1987, 276 с.
2. Методика групповой идентификации ХОП и их метаболитов
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении ХОП и их метаболитов из различных субстратов, очистке и концентрировании экстрактов, последующей идентификации отдельных групп ХОП с помощью адсорбционной ВЭЖХ при спектрофотометрическом детектировании.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
Параметры анализа хлорорганических пестицидов и их метаболитов методом адсорбционной ВЭЖХ представлены в таблице.
Таблица
ПАРАМЕТРЫ ВЭЖХ-АНАЛИЗА ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ
И ИХ МЕТАБОЛИТОВ <*>
--------------------------------
<*> Предел обнаружения для ДДТ и его производных, а также полихлорфенолов и полихлорбензолов 0,05 - 0,5, для других ХОП - 0,1 - 2,0 мкг в пробе.
┌──────────────────────┬──────────┬──────────────────┬────────────────────┐
│ Идентифицируемое │V уд., мкл│Хроматографические│ лямбда макс., нм │
│ соединение │ │ зоны, мкл │ │
├──────────────────────┼──────────┼──────────────────┼────────────────────┤
│ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │
├──────────────────────┼──────────┼──────────────────┼────────────────────┤
│ХБ │160 │160 - 180 │220 │
│1,4-ДХБ │175 │ │220, 280 │
│1,2,3-ТХБ │180 │ │240, 270, 290 │
│1,2,4-ТХБ │170 │ │230, 270, 290 │
│1,3,5-ТХБ │170 │ │230, 280 │
│1,2,4,5-ТеХБ │180 │ │220, 250, 290 │
│1,2,3,4,5,6-ПХБ │165 │ │230, 250, 290 │
│2,4'-ДДТ │236 │190 - 260 │240 │
│4,4'-ДДТ │240 │ │240 │
│2,4'-ДДЭ │245 │ │260 │
│4,4'-ДДЭ │190 │ │250 │
│2,4'-ДДД │260 │ │230 │
│4,4'-ДДД │255 │ │230 │
│2-ХФ │375 │230 - 530 │220, 280 │
│3-ХФ │230 │ │220, 290 │
│4-ХФ │475 │ │260 │
│2,3-ДХФ │350 │ │220, 280 │
│2,4-ДХФ │370 │ │230, 290 │
│2,6-ДХФ │305 │ │220, 280 │
│3,4-ДХФ │230 │ │230, 290 │
│3,5-ДХФ │275 │ │230, 280 │
│2,3,4-ТХФ │350 │ │230, 290 │
│2,3,5-ТХФ │275 │ │220, 290 │
│2,3,6-ТХФ │280 │ │220, 290 │
│2,4,5-ТХФ │290 │ │220, 300 │
│2,4,6-ТХФ │280 │ │220, 300 │
│3,4,5-ТХФ │290 │ │230, 290 │
│2,3,4,6-ТеХФ │370 │ │230, 300 │
│2,3,5,6-ТеХФ │250 │ │230, 290 │
│2,3,4,5,6-ПХФ │530 │ │230, 300 │
│Альдрин │270 │180 - 300 │280 │
│Гексахлорпараксилол │270 │ │280 │
│Гептахлор │295 │ │280 │
│Гептахлорапоксид │300 │ │280 │
│Даконил │180 │ │270 │
│Дилор │275 │ │290 │
│Кельтан │180 │ │280 │
│Полихлорпинен │275 │ │280 │
└──────────────────────┴──────────┴──────────────────┴────────────────────┘
2.1.3. Избирательность метода
Метод групповой идентификации ХОП и их метаболитов избирателен в присутствии азот-, фосфорорганических пестицидов и других органических примесей.
2.2. Реактивы и растворы
Ацетон осч, ТУ 6-09-3513-86.
н-Гексан ч, ТУ 6-09-3375-78.
Натрия сульфат безводный ч, ГОСТ 4166-76.
Серная кислота чда, ГОСТ 4204-77.
Фильтры "синяя лента".
Стандартный раствор многокомпонентной смеси ХОП и их метаболитов в н-гексане с концентрацией индивидуальных компонентов по 100 мкг/мл.
2.3. Приборы и посуда
Хроматограф микроколоночный жидкостный типа "Милихром".
Колонка стандартная металлическая (50 x 2 мм) с сорбентом "Силасорб-600", 5 мкм, Chemapol (ЧССР).
Весы аналитические типа ВЛКТ-50, ГОСТ 24104-80.
Испаритель ротационный типа ИР-1М2, ТУ 25-1173-84.
Линейка металлическая, ГОСТ 25706-83.
Воронки конические, ГОСТ 25336-82.
Колбы круглодонные со шлифом на 100 мл, ГОСТ 25336-82.
Колбы плоскодонные с пришлифованной пробкой на 100 мл, ГОСТ 25336-82.
Пипетки мерные на 1 мл, ГОСТ 1770-74.
Пробирки мерные на 10 мл, ГОСТ 1770-74.
Цилиндры мерные на 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.
2.4. Отбор, хранение и подготовка проб
Отбор, хранение и подготовка проб к анализу проводятся в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и окружающей среды для определения пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за N 2051-79.
2.5. Подготовка к анализу
2.5.1. Приготовление элюента
Элюирующую смесь - н-гексан - ацетон в объемном соотношении 6:1 готовят в день проведения анализа проб: цилиндром вместимостью 100 мл отмеряют 90 мл н-гексана, который выливают в плоскодонную колбу с пришлифованной пробкой, туда же приливают 15 мл ацетона, колбу закрывают пробкой и ее содержимое перемешивают при легком взбалтывании, затем элюирующую смесь фильтруют через складчатый фильтр с прокаленным сульфатом натрия в сосуд для элюента.
2.5.2. Подготовка хроматографической системы к проведению анализа
Подготовку прибора к хроматографическому анализу начинают с промывки насоса и заполнения его свежеприготовленным элюентом, затем приступают к промывке хроматографической системы прибора и заполнению кюветы сравнения используемым элюентом. После установления равномерного нулевого сигнала детектора и снижения шумов до минимума проводят анализ групповой идентификации ХОП и их метаболитов.
2.6. Проведение анализа
2.6.1. Подготовка пробы к проведению анализа методом ВЭЖХ
Пробы биоматериала (органы, ткани теплокровных или человека; биологические жидкости: кровь, моча, желчь, грудное молоко), пищевых продуктов или объектов окружающей среды массой (или объемом), указанной в известных методиках определения ХОП и (или) их метаболитов, экстрагируют органическим растворителем согласно описанию хода проведения анализа. Для удаления из гексанового экстракта пробы сопутствующих органических примесей природного происхождения, а также азот-, фосфорорганических пестицидов и продуктов их превращения, влияющих на анализ смеси хлорорганических соединений, проводится предварительная их переэкстракция в концентрированную серную кислоту, затем гексановый экстракт высушивают сульфатом натрия и упаривают на ротационном испарителе при 60 °C до небольшого объема, который переносят в мерную пробирку и упаривают досуха в токе азота особой чистоты. Сухой остаток пробы растворяют в 0,2 мл элюента (смесь н-гексана с ацетоном (6:1)) и проводят хроматографическое разделение и идентификацию отдельных групп ХОП и их метаболитов.
2.6.2. Хроматографическое разделение и идентификация отдельных групп ХОП и их метаболитов
Разделение и групповая идентификация ХОП и их метаболитов осуществляются при следующих условиях хроматографирования:
неподвижная фаза - "Силасорб-600", 5 мкм, подвижная фаза - гексан - ацетон в объемном соотношении 6:1; скорость элюирующего потока 200 мкл/мин.; детектор - переменно-волновой спектрофотометр с проточной ячейкой 1,6 мкл; под диапазон чувствительности 3,2 А; время измерения выходного сигнала 0,6 с; скорость протяжки диаграммной ленты 720 мм/ч; длина волны (лямбда) поглощения светового потока (нм) определяется идентифицируемой группой соединений.
Близкие объемы удерживания (V уд.) представителей отдельных групп хлорорганических соединений и подбор соответствующей длины волны позволяют разграничить зоны хроматографирования, характерные для разных групп, что обеспечивает их идентификацию в сложной пестицидной смеси пробы при сопоставлении с зонами хроматографирования стандартной смеси соответствующих групп соединений.
2.6.3. Примеры идентификации отдельных групп ХОП в многокомпонентной смеси неизвестного состава пробы
Пример 1. Из 0,2 мл сконцентрированного раствора пробы в элюенте 20 мкл вводят в хроматографическую колонку и проводят анализ при 280 нм в ранее описанном режиме.
При этой длине волны, близкой к лямбда макс. некоторых из исследуемых соединений, можно идентифицировать:
1) группу хлорбензолов (V уд. 160 - 180 мкл);
2) группу хлорфенолов (V уд. 230 - 530 мкл);
3) группу соединений представителей различных классов ХОП - альдрин, ГХПК, ГПХ, ГПХЭ и некоторых других (V уд. 180 - 300 мкл).
Идентификация 4,4'-ДДТ и его производных достигается повторным хроматографированием при лямбда 230 нм. Объемы удерживания соединений этой группы находятся в пределах 235 - 260 мкл, а V уд. 4,4'-ДДЭ - 190 мкл. При данных условиях идентификации группы 4,4'-ДДТ и его производных не мешают присутствующие в пробе ХОП других классов (альдрин и другие), а также детектируемые на этой длине волны представители группы хлорбензолов (3-ХФ, 3,4-ДХФ, 2,3,5,6-ТеХФ) с близкими объемами удерживания (230, 250 мкл). Окончательную идентификацию спорных хроматографических сигналов осуществляют подбором необходимой длины волны и снятием развернутых спектров соединений (таблица).
Пример 2. Аликвотная часть конечного раствора исследуемой пробы в элюенте вводится в хроматограф, и проводится групповое разделение смеси ХОП неизвестного состава при 230 нм. В этих условиях регистрируемые выходные сигналы позволяют идентифицировать следующие группы соединений: хлорбензолы (V уд. 160 - 180 мкл)4,4'-ДДТ и его производные (V уд. 235 - 260; V уд. 4,4'-ДДЭ 190 мкл). Однако идентификация последних может быть затруднена наличием в пробах хлорфенолов (3-, 3,4- и 2,3,5,6-хлорфенолы имеют близкие с компонентами группы ДДТ объемы удерживания). Поэтому окончательную идентификацию осуществляют после повторного хроматографирования пробы при лямбда 220 нм, близкой к лямбда макс. указанных хлорфенольных соединений. Надежность идентификации может быть повышена снятием развернутого спектра поглощения при остановке процесса хроматографирования на соответствующем выходном сигнале с дискретностью 10 или 2 нм.
Пример 3. Аликвотную часть конечного раствора пробы в элюенте хроматографируют в описанном выше режиме при лямбда 280 нм. В этом случае возможна идентификация трех групп соединений: хлорбензолы, хлорфенолы и ХОП различных классов (альдрин и др.), за исключением ДДТ и его производных. Наложение хроматографической зоны ряда хлорфенольных соединений (объем удерживания от 275 до 305 мкл) и представителей хлорорганических пестицидов других классов не позволяет провести правильную идентификацию этих соединений, поэтому анализ повторяют при лямбда 310 нм. В этих условиях ДДТ и его производные и основная часть хлорфенолов (за исключением 2,4,6-ТХФ, 2,3,4,6-ТеХФ и 2,3,4,5,6-ПХФ) не регистрируются. Объемы удерживания двух последних соединений не совпадают с хроматографической зоной ХОП (370 и 530 мкл), что устраняет их влияние на идентификацию. Помехи 2,4,6-ТХФ можно устранить переключением спектрофотометра на 260 нм при повторном анализе пробы, когда выходной сигнал этого соединения не регистрируется, или записав развернутый спектр 2,4,6-ТХФ, имеющий две лямбда макс. - 220 и 300 нм.
При проведении число операций по хроматографическому разделению и идентификации может быть ограничено в соответствии с задачами проводимых исследований.
2.6.4. Обработка результатов анализа
Качественный состав идентифицируемых групп ХОП и их метаболитов определяется путем сопоставления их хроматографических зон в смеси неизвестного состава пробы и многокомпонентной стандартной смеси идентифицируемых групп соединений. После установления группового состава смеси хлорорганических пестицидов в анализируемой пробе, исходя из наличия отдельных групп, выбирают наиболее эффективный метод (ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ) для дальнейшего количественного измерения индивидуальных компонентов отдельных групп и их метаболитов.
3. Требования безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, концентрированными кислотами.
Остальные материалы раздела: Указы СССР 1917-1992
Предыдущая Методические указания по ускоренному определению 2.4-Д и ТХА в биоматериале органы и ткани мелких наземных и почвенных животных методом газСледующая Методические указания по газохроматографическому определению гербицида бенсульфурон-метила лондакса в воде утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6