Путь:
Навигация
- Декреты СССР 1917-1992
- Законы СССР 1917-1992
- Инструкции СССР 1917-1992
- Обращения СССР 1917-1992
- Письма СССР 1917-1992
- Положения СССР 1917-1992
- Постановления СССР 1917-1992
- Правила СССР 1917-1992
- Приказы СССР 1917-1992
- Прочие СССР 1917-1992
- Распоряжения СССР 1917-1992
- Указы СССР 1917-1992
- Циркуляры СССР 1917-1992
Язык [ РУССКИЙ ]
Новые материалы
- Геноцид собственного народа или зеленская чума 21 века 2024-04-27
- Бизнес-ланч как организовать обед с выгодой 2024-03-23
- Болезни, которые успешно лечатся в современных клиниках 2024-03-10
- Пополнить Steam Пополнение Счета через Steam 2024-03-05
- 10 способов оптимизации пространства в маленькой ванной 2024-02-03
- Магия звука выберите подходящий музыкальный инструмент для вашего творчества 2024-01-22
- Куда можно поехать отдохнуть в России 2024-01-22
- Преимущества доставки еды комфорт, разнообразие и экономия времени 2024-01-14
- Все что нужно знать о покупке земли 2024-01-14
- NATO-УГРОЗА СТАБИЛЬНОСТИ И БЕЗОПАСНОСТИ УКРАИНЫ 2023-12-05
- Займ Бесплатно на Карту Онлайн. Финансовая Гибкость и Удобство в Одном Клике 2023-11-30
- Преимущества краткосрочного займа на карту 2023-11-27
- Украине уже пора снять розовые очки и оценить, что значит война, нацизм и терроризм 2023-11-03
- юрии 0000-00-00
- Понимание основ охраны труда 2023-10-11
Картинка недели
Указы СССР 1917-1992
Категории
Методические указания по определению КМП и его метаболита МП в воде, почве, растительном и биологическом материале методом тонкослойной х
Дата публикации: До 2014-05-28Просмотров: 708
Материал приурочен к дате: 1988-07-14
Прочие материалы относящиеся к: Дате 1988-07-14 Материалы за: Год 1988
Автор: Мета Гость
Утверждены
Минздравом СССР
14 июля 1988 г. N 4661-88
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ КМП И ЕГО МЕТАБОЛИТА МП В ВОДЕ,
ПОЧВЕ, РАСТИТЕЛЬНОМ И БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны Ю.А. Бунятяном, М.С. Петросян (Филиал ВНИИГИНТОКС).
Препарат КМП рекомендуется для применения в сельском хозяйстве в качестве ингибитора нитрификации азотных удобрений на посевах риса, пшеницы, овощей, хлопчатника. МП - продукт разложения КМП.
Краткая характеристика препаратов. КМП - 1-карбамоил-3(5)-метилпиразол.
Брутто-формула C H N O. Молекулярная масса 125,1. Химически чистое
5 7 3
соединение - кремоватый порошок с резким запахом, т. пл. 127 °C. Хорошо
растворим в ацетоне, хлороформе, этаноле, растворимость в воде 6,5 мг/л.
При нагревании до 180 °C, а также при действии разбавленных кислот и
щелочей разлагается с образованием МП. КМП - среднетоксичное соединение,
ЛД для крыс составляет 1280 мг/кг. МП - 3(5)-метилпиразол. Брутто-формула
50
C H N . Молекулярная масса 82,1. Химически чистое соединение -
4 6 2
светло-желтая жидкость с пиридиноподобным запахом, плотностью
1,008 мг/куб. м при 20 °C, т. кип. 204 °C. Неограниченно смешивается с
водой и большинством органических растворителей. МП - среднетоксичное
соединение, ЛД для крыс составляет 240 мг/кг.
50
Принцип метода. Метод основан на извлечении КМП и МП из исследуемой пробы органическим растворителем, очистке экстрактов в кислой среде, реэкстракции препаратов в щелочной среде и хроматографическом разделении в тонком слое пластинок "Силуфол". Зоны локализации препарата и его метаболита обнаруживаются после предварительного облучения УФ-светом и обработки пластинок йод-крахмальным реагентом или реагентом Паули.
Метрологическая характеристика метода представлена в таблице 128.
Таблица 128
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА (n = 20, p = 0,95)
┌─────────────┬──────────┬─────────────┬────────┬───────────┬─────────────┐
│Анализируемый│Предел │ Диапазон │Среднее │Стандартное│Доверительный│
│ объект │обнаруже- │определяемых │значение│отклонение,│ интервал │
│ │ния, мг/кг│концентраций,│опреде- │ % │ среднего, % │
│ │или л │ мг/кг или л │ления, %│ │ │
├─────────────┴──────────┴─────────────┴────────┴───────────┴─────────────┤
│ КМП │
│ │
│Вода │0,01 │0,01 - 0,1 │93,0 │+/- 3,07 │+/- 1,40 │
│Почва │0,04 │0,04 - 0,4 │85,0 │+/- 1,77 │+/- 0,82 │
│Рис │0,04 │0,04 - 0,4 │90,2 │+/- 3,15 │+/- 1,47 │
│Пшеница │0,04 │0,04 - 0,4 │89,6 │+/- 2,96 │+/- 1,38 │
│Кукуруза │0,04 │0,04 - 0,4 │85,0 │+/- 1,41 │+/- 0,67 │
│Томаты │0,08 │0,08 - 0,4 │85,0 │+/- 1,47 │+/- 0,82 │
│Картофель │0,08 │0,08 - 0,4 │83,0 │+/- 1,99 │+/- 1,00 │
│Биосубстраты │0,2 │0,2 - 2,0 │89,0 │+/- 2,53 │+/- 1,04 │
│ │
│ МП │
│ │
│Вода │0,01 │0,01 - 0,1 │93,0 │+/- 3,07 │+/- 1,4 │
│Почва │0,04 │0,04 - 0,4 │89,0 │+/- 1,89 │+/- 0,78 │
│Рис │0,04 │0,04 - 0,4 │91,0 │+/- 5,3 │+/- 2,19 │
│Пшеница │0,04 │0,04 - 0,4 │90,4 │+/- 4,45 │+/- 1,34 │
│Кукуруза │0,04 │0,04 - 0,4 │89,0 │+/- 2,53 │+/- 1,04 │
│Томаты │0,08 │0,08 - 0,4 │85,0 │+/- 1,77 │+/- 0,82 │
│Картофель │0,08 │0,08 - 0,4 │81,1 │+/- 1,83 │+/- 0,76 │
│Биосубстраты │0,2 │0,2 - 2,0 │85,0 │+/- 1,77 │+/- 0,82 │
└─────────────┴──────────┴─────────────┴────────┴───────────┴─────────────┘
Избирательность метода. В предлагаемых условиях хроматографирования метод специфичен в присутствии близких по структуре и области применения таких соединений, как нитрапирин, 6-хлорпиколиновая кислота, ХГИ, ТМДИ, ГМДИ, АТГ, а также применяющихся на посевах риса - пропанид, базагран.
Реактивы и материалы. КМП х.ч. МП х.ч. Хлороформ х.ч. н-Гексан х.ч.
Этиловый спирт х.ч. Хлороводородная кислота концентрированная х.ч., 1 н.
Безводный сульфат натрия ч. Ацетон х.ч. Натрия гидроксид х.ч.,
20-процентный. Гидроксид калия х.ч., 10-процентный. Нитрит натрия х.ч.,
10-процентный. Кислота сульфаниловая безводная, ч.д.а. Калий
марганцовокислый х.ч., 3-процентный. Йодид калия х.ч., 1-процентный в.р.
Крахмал водорастворимый х.ч., 3-процентный. Фильтры бумажные обеззоленные
"синяя лента", предварительно промытые смесью хлороформ-ацетон (1:1).
Пластинки хроматографические "Силуфол" УФ размером 15 x 15 см.
254
Стандартные растворы КМП и МП, содержащие 1; 10 и 100 мкг/мл. Хранить в
холодильнике не более 3 мес.
Проявляющие реагенты: N 1 - сульфаниловая кислота диазотированная (реагент Паули). Приготовление соли диазония: 5 г сульфаниловой кислоты растворяют в 25 мл 10-процентного раствора гидроксида калия. Охлажденный раствор смешивают с 25 мл 10-процентного раствора нитрита натрия. Этот раствор по каплям при перемешивании прибавляют к охлажденной льдом хлороводородной кислоте (40 мл хлороводородной кислоты + 20 мл дистиллированной воды). Выпавший осадок отмывают на воронке Бюхнера спиртом и сушат на фильтре. При хранении в холодильнике в темной склянке соль устойчива 3 мес. Для опрыскивания готовят рабочий раствор - 1,5-процентный раствор диазониевой соли в 15-процентном растворе гидроксида натрия. Раствор готовят перед употреблением в количествах, необходимых для разового пользования; N 2 - йод-крахмальные реагенты: а - 1-процентный раствор йодида калия; б - 3-процентный раствор крахмала. Перед употреблением смешать растворы а, б и этанол в соотношении 2,5:2,5:1. Раствор для хлорирования. Смешивают равные объемы 3-процентного раствора перманганата калия и 25-процентного раствора хлороводородной кислоты. Готовят перед употреблением в количествах, необходимых для разового пользования.
Приборы, аппаратура, посуда. Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4. Ротационный вакуумный испаритель. Колбы: мерные на 100 мл; конические на 100 и 250 мл; круглодонные на 100 мл. Воронки делительные и химические. Микропипетки на 0,1 и 0,2 мл. Цилиндры мерные на 50 и 100 мл. Камера хроматографическая. Пульверизаторы стеклянные. Камера для хлорирования (эксикатор).
Отбор проб. Отобранные пробы анализировать сразу.
Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды (100 мл) помещают в коническую колбу, прибавляют безводный сульфат натрия до насыщения и экстрагируют КМП и МП хлороформом трижды порциями по 50; 30 и 30 мл. Объединенные экстракты фильтруют в перегонные колбы через фильтр "синяя лента" и слой безводного сульфата натрия (1 - 2 г) и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре не более 30 °C до объема 0,1 - 0,2 мл. Остаток количественно с помощью хлороформа наносят на хроматографическую пластинку.
Навеску (25 г) измельченной и просеянной почвы трижды экстрагируют ацетоном порциями по 50 мл. Объединенные экстракты фильтруют через фильтр "синяя лента" и слой безводного сульфата натрия (1 - 2 г) и отгоняют растворитель досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 30 °C. К сухому остатку прибавляют 10 мл 1 н раствора хлороводородной кислоты, тщательно ополаскивают колбу и переносят в коническую колбу на 100 мл через фильтр "синяя лента". Колбу еще дважды по 10 мл промывают 1 н раствором хлороводородной кислоты и сливают в ту же колбу. Объединенный экстракт хлороводородной кислоты подщелачивают 20-процентным раствором гидроксида натрия до pH 9, затем прибавляют безводный сульфат натрия до насыщения (10 - 12 г) и экстрагируют КМП и МП хлороформом трижды по 15 - 20 мл. Далее поступают аналогично анализу воды.
Измельченную пробу растительного материала (рис, пшеница, кукуруза, картофель, томаты) (25 г) экстрагируют хлороформом трижды по 50 мл. Растворитель фильтруют в перегонную колбу через фильтр "синяя лента" и слой безводного сульфата натрия. Далее поступают аналогично анализу почвы.
Экстракцию из биологического материала (кровь, печень, легкие, почки, сердце, селезенка, мозг, моча, кал) проводят следующим образом. Измельченную пробу (5 г или 5 мл) трижды экстрагируют хлороформом по 15 - 20 мл. Объединенный экстракт фильтруют в перегонную колбу через фильтр "синяя лента" и слой безводного сульфата натрия. Далее поступают аналогично анализу почвы.
Условия хроматографирования. После отгонки растворителя пробы с помощью хлороформа количественно наносят на пластинки "Силуфол" на расстоянии 1 см от нижнего края пластинки. Справа и слева от пробы наносят стандартные растворы КМП и МП (в одну точку), содержащие известные количества препаратов. Развитие хроматограммы проводят в системе гексан-ацетон (5:3). После поднятия фронта растворителя на 14 см пластинку проветривают на воздухе до полного удаления растворителей. Затем пластинку подвергают облучению УФ-светом и течение 35 - 40 мин. и обрабатывают из пульверизатора проявляющими реагентами N 1 или N 2.
1. Опрыскивание рабочим раствором реагента Паули (на одну пластинку расходуется 1,5 - 2 мл реагента). Зоны локализации КМП и МП обнаруживаются в виде красных пятен на белом фоне. Окраска пятен МП устойчива в течение нескольких дней, КМП - 5 - 10 мин. Предел обнаружения на пластинке составляет для КМП 2 мкг; МП - 0,5 мкг.
2. После УФ-облучения пластинки помещают в камеру с раствором для
хлорирования на 3 мин., оставляют пластинку на воздухе до полного удаления
запаха хлора (около 15 мин.) и обрабатывают из пульверизатора
йод-крахмальным проявляющим реагентом. Зоны локализации обнаруживаются в
виде синих пятен на светлом фоне. Окраска пятен устойчива в течение 3 дней.
Предел обнаружения на пластинке составляет для КМП 0,1 мкг, для МП 1 мкг.
Величины R составляют для КМП 0,55 +/- 0,02, для МП 0,35 +/- 0,02.
f
Обработка результатов анализа. Количественную оценку проводят путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартных растворов. Содержание КМП и МП в анализируемой пробе (X, мг/кг или л) определяют по формуле:
A
X = -,
P
где:
A - количество КМП, МП, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;
P - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.
Требования безопасности. Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях.
Остальные материалы раздела: Указы СССР 1917-1992
Предыдущая Методические указания по определению тилта в почве и зерне методом газожидкостной хроматографии утв. Минздравом СССР 14.07.1988 N 4660-88Следующая Методические указания по определению фюзилада в семенах и листьях сои методом тонкослойной хроматографии утв. Минздравом СССР 14.07.1988 N 4669-88