Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1989 г. N 5036-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СМЕСИ МЕТАФОСА, БАЙЛЕТОНА И ТИЛТА
В РАСТЕНИЯХ ПШЕНИЦЫ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Краткая характеристика препаратов: метафоса - см. Унифицированную методику; байлетона - с. 453 (т. 1); тилта - с. 545 (т. 1).
Препараты рекомендуют применять в борьбе с возбудителями болезней и вредителями пшеницы при интенсивной технологии возделывания зерновых культур.
Принцип метода. Метод основан на извлечении смеси соединений
хлороформом, упаривании экстракта досуха, растворении сухого
остатка водой и переэкстракции препаратов из водного раствора
хлороформом с последующим хроматографическим определением в тонком
слое на пластинках "Силуфол" УФ .
254
Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 168.
Таблица 168
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
┌───────────────────────────────┬─────────────┬─────────────┬─────────────┐
│ Параметры │ Метафос │ Байлетон │ Тилт │
├───────────────────────────────┼─────────────┼─────────────┼─────────────┤
│Минимально детектируемое │0,1 │0,1 │0,1 │
│количество, мкг │ │ │ │
│Нижний предел определения, │0,01 │0,01 │0,01 │
│мг/кг │ │ │ │
│Варьирование, % │70 - 90 │75 - 90 │75 - 95 │
│Среднее значение определения, %│81,0 │83,5 │85,7 │
│Стандартное отклонение, % │+/- 8,8 │+/- 9,2 │+/- 7,9 │
│Доверительный интервал среднего│81,0 +/- 11,3│83,5 +/- 12,2│83,7 +/- 10,2│
│при p = 0,95 и n = 5 │ │ │ │
└───────────────────────────────┴─────────────┴─────────────┴─────────────┘
Избирательность метода. Метод специфичен, другие фосфорорганические соединения, применяемые при выращивании зерновых культур, определению байлетона, тилта и метафоса не мешают.
Реактивы и материалы. Ацетон особой чистоты. Гексан ч.
Хлороформ х.ч. Безводный сульфат натрия ч. Индикатор бромфеноловый
синий ч.д.а. Нитрат серебра ч.д.а. Лимонная кислота,
2,5-процентный раствор лимонной кислоты. Проявляющие реактивы: N 1
- 0,05-процентный раствор бромфенолового синего в 50-процентном
этаноле; N 2 - 1-процентный водный раствор нитрата серебра.
Пластинки "Силуфол" УФ . Стандартные растворы (0,1 мг/мл):
254
метафоса в ацетоне; байлетона в этаноле; тилта в этаноле.
Приборы и посуда. Аппарат для встряхивания. Колбы круглодонные; мерные на 100 мл. Холодильник стеклянный для отгона растворителя. Баня водяная. Воронки химические; делительные. Цилиндры мерные. Пульверизатор стеклянный. Камера для хроматографирования (эксикатор). Капиллярные пипетки для нанесения проб. Микропипетки на 0,1 мл. Компрессорная установка УК-40-2.
Ход анализа. Экстракция. Навеску измельченного образца (50 г
зеленого растения или соломы) помещают в коническую колбу,
заливают 100 - 200 мл хлороформа до полного покрытия пробы.
Экстрагируют 1 ч на аппарате для встряхивания. Экстракт фильтруют
через слой безводного сульфата натрия, пробу трижды промывают
хлороформом, экстракты объединяют. На водяной бане при температуре
40 - 50 °C под вакуумом отгоняют растворитель до объема 0,1 - 0,5
мл. Остаток высушивают на воздухе. Высушенный остаток заливают 50
мл дистиллированной воды и оставляют на 1 ч, фильтруют через
воронку с фильтром в делительную воронку. Колбу трижды промывают
дистиллированной водой и присоединяют к водному раствору в
делительной воронке. Из воды смесь препаратов экстрагируют трижды
хлороформом порциями по 100, 50, 50 мл, энергично встряхивая
воронку в течение 3 мин. Экстракты фильтруют через слой безводного
сульфата натрия в круглодонную колбу. Растворитель отгоняют на
водяной бане при температуре 40 - 50 °C под вакуумом до объема 0,1
- 0,2 мл. Остаток наносят на пластинку "Силуфол"УФ .
254
Хроматографирование и проявление хроматограмм. Пластинку с
нанесенной пробой и серией стандартов помещают в
хроматографическую камеру. В качестве подвижной фазы используется
смесь н-гексана и ацетона в объемном соотношении 2,5:1. После того
как подвижная фаза поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают
из камеры и сушат на воздухе до полного испарения растворителя.
Опрыскивают пластинку проявляющими реагентами N 1 и 2 в
соотношении 1:1, затем 2,5-процентным раствором лимонной кислоты
для обесцвечивания фона. При наличии препаратов в исследуемой
пробе на пластинке проявляются пятна: метафоса - сине-фиолетовое с
R 0,48, байлетона - ярко-голубое с R 0,38 и тилта - синее с R
f f f
0,30. Перед проявлением пластинку просматривают в УФ-свете
спектроскопа. Пятна метафоса и тилта не светятся, байлетона
светятся сиреневым цветом.
Обработка результатов анализа. Количественную оценку проводят путем сравнения интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандартов.
Содержание препарата в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
A
X = -,
P
где:
A - количество препарата, найденное путем сравнения интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандартных растворов, мкг;
P - масса исследуемой пробы, г.