Путь:
Навигация
- Декреты СССР 1917-1992
- Законы СССР 1917-1992
- Инструкции СССР 1917-1992
- Обращения СССР 1917-1992
- Письма СССР 1917-1992
- Положения СССР 1917-1992
- Постановления СССР 1917-1992
- Правила СССР 1917-1992
- Приказы СССР 1917-1992
- Прочие СССР 1917-1992
- Распоряжения СССР 1917-1992
- Указы СССР 1917-1992
- Циркуляры СССР 1917-1992
Язык [ РУССКИЙ ]
Новые материалы
- Геноцид собственного народа или зеленская чума 21 века 2024-04-27
- Бизнес-ланч как организовать обед с выгодой 2024-03-23
- Болезни, которые успешно лечатся в современных клиниках 2024-03-10
- Пополнить Steam Пополнение Счета через Steam 2024-03-05
- 10 способов оптимизации пространства в маленькой ванной 2024-02-03
- Магия звука выберите подходящий музыкальный инструмент для вашего творчества 2024-01-22
- Куда можно поехать отдохнуть в России 2024-01-22
- Преимущества доставки еды комфорт, разнообразие и экономия времени 2024-01-14
- Все что нужно знать о покупке земли 2024-01-14
- NATO-УГРОЗА СТАБИЛЬНОСТИ И БЕЗОПАСНОСТИ УКРАИНЫ 2023-12-05
- Займ Бесплатно на Карту Онлайн. Финансовая Гибкость и Удобство в Одном Клике 2023-11-30
- Преимущества краткосрочного займа на карту 2023-11-27
- Украине уже пора снять розовые очки и оценить, что значит война, нацизм и терроризм 2023-11-03
- юрии 0000-00-00
- Понимание основ охраны труда 2023-10-11
Картинка недели
Указы СССР 1917-1992
Категории
Методические указания по определению метилнитрофоса и фенитрооксона в зерне и продуктах переработки зерна хроматоэнзимным и газохромато
Дата публикации: До 2014-05-28Просмотров: 718
Материал приурочен к дате: 1980-01-28
Прочие материалы относящиеся к: Дате 1980-01-28 Материалы за: Год 1980
Автор: Мета Гость
Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
28 января 1980 г. N 2132-80
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МЕТИЛНИТРОФОСА И ФЕНИТРООКСОНА
В ЗЕРНЕ И ПРОДУКТАХ ПЕРЕРАБОТКИ ЗЕРНА ХРОМАТОЭНЗИМНЫМ
И ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика пестицидов
Метилнитрофос - O,O-диметил-O-(3-метил-4-нитрофенил)-тиофосфат.
CH
S ____ 3
|| // \\
(CH O) P-O- NO C H O NPS
3 2 \____/ 2 9 12 5
---- Мол. масса 277,2.
Синонимы: метатион, сумитион, фенитротион, фолитион, польвадофос, вататион, динатион, новотион, препарат 56600, Байер 41831, агратион-20.
Химически чистый препарат - светлая жидкость со слабым неприятным
запахом. Т - 95 °С при 0,01 мм рт. ст.; плотность 1,308; коэффициент
кип
-6
преломления 1,5505; давление паров при 20 °С - 6 х 10 мм рт. ст.;
летучесть 0,82 мг/куб. м при 20 °С2,33 мг/куб. м при 30 °С; 6,11 мг/куб.
м при 40 °С. Растворимость в воде около 30 мг/л, хорошо растворяется в
большинстве органических растворителей.
Препарат гидролизуется в щелочной среде (в 0,1 н NaOH при 30 °С период полураспада 30 минут). При нагревании выше 100 °С изомеризуется и может разлагаться со взрывом. Хранить препарат необходимо в эмалированной или стеклянной таре, железо способствует разложению препарата. Выпускается в форме 30-процентного к.э. и 50-процентного к.э.
ПДК в воздухе рабочей зоны 0,1 мг/куб. м. ДОК в полевых культурах утверждены 0,1 мг/кг. В настоящее время рекомендованы ДОК в зерне 1 мг/кг, муке 0,3 мг/кг, хлебе 0,1 мг/кг. Применяется в качестве контактного инсектицида и акарицида для борьбы с вредителями овощных, технических, плодовых культур, обработки незагруженных зернохранилищ, рекомендован для обработки зерна.
Фенитрооксон - O,O-диметил-O-(3-метил-4-нитрофенил)-фосфат - токсический метаболит метилнитрофоса.
CH
O ____/ 3
|| // \\ C H O NP
(CH O) P-O- NO 9 12 6
3 2 \____/ 2 Относ. мол. масса 261,1.
В чистом виде - светлая жидкость со слабым неприятным запахом.
2. Методика определения метилнитрофоса и фенитрооксона
в зерне, муке, хлебе, отрубях хроматоэнзимным
и газохроматографическим методом
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении метилнитрофоса (МНФ) и его токсического метаболита фенитрооксона из зерна, муки, хлеба, отрубей смесью органических растворителей (н-гексан - диэтиловый эфир, 7:3), очистке охлажденным ацетоном и параллельном определении их в аликвотных частях пробы методом газожидкостной хроматографии и хроматографии в тонком слое с энзимным проявлением.
Газожидкостной хроматографией (ГЖХ) определение проводится на
хроматографе марки "Цвет" с термоионным детектором (ТИД) с использованием в
качестве неподвижной фазы 5% SE-30 на хроматоне N-AW-ДМСS, газа-носителя -
азота. Этот метод позволяет раздельно определять метилнитрофос (t 3,8) и
уд.
фенитрооксон (t 3 минуты); чувствительность определения каждого - 0,001
уд.
мкг (т.е. 0,02 мг/кг при навеске муки, хлеба, отрубей 20 г). Количественное
определение проводится по высоте пиков. Определению фенитрооксона мешает
присутствие метафоса (t 3,16 мин.). Для идентификации в этом случае
уд.
используется хроматоэнзимный метод.
Тонкослойно-хроматографическое определение с энзимным проявлением
(ТСХЭ) основано на разделении соединений в тонком слое силикагеля КСК с
подвижной фазой н-гексан - ацетон 4:1 и обнаружении их по способности
угнетать холинэстеразу (ХЭ). При этом идентификация их проводится как по
величинам R (R МНФ 0,48; фенитрооксона 0,28), так и по условиям
f f
обработки. Так, обнаружение фенитрооксона, являющегося Р = 0 аналогом
метилнитрофоса, может быть проведено непосредственно после обработки
пластинки субстратом, а для обнаружения МНФ необходима предварительная
активация пестицида на пластинке бромом. Этот метод позволяет раздельно
определять МНФ и фенитрооксон; чувствительность определения МНФ без
активации 0,10 - 0,15 мкг, а с активацией бромом - 0,001 мкг (0,02 мг/кг);
чувствительность определения фенитрооксона без активации 0,001 мкг (0,02
мг/кг). Определению метилнитрофоса мешает метафос (R метафоса 0,47).
f
2.1.2. Метрологическая характеристика метода:
- диапазон определяемых концентраций 0,5 - 50 мкг МНФ и фенитрооксона в анализируемой пробе;
- предел обнаружения МНФ и фенитрооксона 0,001 мкг (0,025 мг/кг);
- размах варьирования для МНФ и фенитрооксона 80 - 85% методом ГЖХ и 75 - 105% - методом ТСХЭ;
- среднее значение определения стандартных количеств МНФ и фенитрооксона 81% (ГЖХ) и 89% (ТСХЭ);
- стандартное отклонение при ГЖХ - 4,2%, при ТСХЭ - 8,3%;
- относительное стандартное отклонение при ГЖХ - 0,05, при ТСХЭ - 0,09;
- доверительный интервал среднего при р = 0,95 и n = 5 для МНФ и фенитрооксона методом ГЖХ 81 +/- 4,9, методом ТСХЭ - 89 +/- 9,8%.
Сочетание указанных методов позволяет идентифицировать метилнитрофос и фенитрооксон в присутствии близкого к ним по химической структуре пестицида метафоса.
2.2. Реактивы и растворы
Основной стандартный раствор пестицидов (А) - смесь стандартных растворов метилнитрофоса и фенитрооксона по 100 мкг/мл каждого (по 10 мг каждого вещества растворяют в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл).
Рабочие стандартные растворы готовят разбавлением основного раствора "А".
Раствор "Б" - 0,5 мл раствора "А" доводят в мерной колбе до 100 мл ацетоном (содержание каждого вещества составляет 0,5 мкг/мл).
Раствор "В" - 5 мл раствора "Б" доводят в мерной колбе до 25 мл (содержание каждого вещества 0,1 мкг/мл).
2.2.1. Для экстракции
н-Гексан, х.ч.
Диэтиловый эфир медицинский.
Ацетон, х.ч.
Фильтры бумажные (красная лента).
2.2.2. К методу ГЖХ
Стационарная фаза - метилсиликоновый полимер SE-30 в количестве 5% на хроматоне N-AW-ДМСS, 100 - 120 меш.
Водород.
Азот особой чистоты (содержание O не должно превышать 0,003%).
2
Стекловата.
2.2.3. К методу ТСХ с энзимным проявлением
Силикагель КСК, раздробленный и просеянный через сито, 100 меш.
Кальций сернокислый (CaSO х 2H O), прокаленный в течение 6 часов при
4 2
160 °С.
Бром.
Индоксилацетат, ч.д.а., ТУ-711-57-69.
Калий железосинеродистый - 0,05 М раствор (1,645 г растворяют в 100 мл дистиллированной воды).
Калий железистосинеродистый - 0,05 М раствор (2,110 г - в 100 мл H O).
2
Ортофосфорная кислота, х.ч.
Борная кислота, х.ч.
Уксусная кислота, ледяная.
Едкий натр, х.ч.
Буферный раствор pH = 8,69 - готовят раствор смеси ортофосфорной (2,1 мл), уксусной (2,3 мл), борной (2,47 г) кислот и доводят дистиллированной водой до 1 л. Для получения буфера с pH = 8,69 к 100 мл указанного раствора прибавляют 65 мл 0,2 н раствора едкого натра, который готовят растворением 0,800 г NaOH в дистиллированной воде в мерной колбе емкостью 100 мл.
Ферментный препарат получают из печени крупного рогатого скота (свежую, однократно замороженную и сохраняемую в дальнейшем в холодильнике печень можно использовать в течение 6 месяцев). Для приготовления ферментного раствора 1 г печени растирают в ступке с 9 мл буферного раствора и фильтруют через вату. К 1 мл полученной сыворотки прибавляют 4 мл буферного раствора и используют этот раствор для опрыскивания пластинок. Используют свежеприготовленный раствор.
Проявляющий реактив: 10 мг индоксилацетата растворяют в 6 мл этанола, прибавляют 6 мл дистиллированной воды (pH = 8,69), 2 мл раствора железосинеродистого и 2 мл железистосинеродистого калия и хорошо перемешивают. Раствор готовят непосредственно перед опрыскиванием. На пластинку расходуется 3 - 4 мл смеси.
2.3. Приборы и посуда
2.3.1. Для экстракции
Колбы конические плоскодонные с пробками емкостью 250 и 100 мл.
Воронки фильтровальные.
Ротационный испаритель с набором колб емкостью 50 и 100 мл.
Пробирки мерные с пробками емкостью 5 - 10 мл.
2.3.2. Для ГЖХ
Хроматограф марки "Цвет" с термоионным детектором.
Баллон с азотом особой чистоты.
Баллон с водородом.
Колонки стеклянные, длина - 1 м, внутренний диаметр - 3 мм.
Микрошприц на 10 мкл.
2.3.3. Для ТСХЭ
Стеклянные пластинки размером 9 х 12 см.
Камера для хроматографирования.
Пульверизаторы стеклянные.
Камера для опрыскивания.
Компрессор или баллон с азотом или сжатым воздухом для равномерного мелкодисперсного опрыскивания пластинок.
Пипетки на 1 мл, 5 мл, 10 мл.
Мерные колбы емкостью 25 мл, 100 мл.
Микрошприцы на 10 мкл или микропипетки до 0,1 мл для нанесения стандартных растворов и проб.
Термостат СШ-35 с температурой нагрева 37 - 40 °С.
Ступка керамическая.
Эксикатор.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1. Подготовка колонок для ГЖХ
Используют готовую фазу SE-30 5% на хроматоне N-AW-ДМСS. Если нет готовой фазы, 0,7 г SE-30 растворяют в небольшом количестве хлористого метилена и приливают в круглодонную колбу со шлифом, в которой находится 14 г носителя (хроматон N-AW-ДМСS), залитого полностью тем же растворителем. Тщательно перемешивают всю массу и выпаривают растворитель на ротационном испарителе досуха. Сухой остаток подсушивают в сушильном шкафу 4 часа при температуре 80 °С. Приготовленный носитель хранят в склянке с притертой пробкой.
Для заполнения колонки один конец ее закрывают стеклянной ватой, а в другой через воронку засыпают носитель. Заполняют колонку постукиванием, закрывают второй конец тампоном из стеклянной ваты.
2.4.2. Приготовление пластинок для ТСХЭ
Для приготовления 12 пластинок берут 35 г силикагеля КСК, 2 г сернокислого кальция, приготовленного как описано выше, и 90 мл дистиллированной воды. Силикагель с гипсом растирают в фарфоровой ступке, прибавляют воду и размешивают до образования однородной массы. 10 г суспензии наносят на пластинку и равномерно распределяют по поверхности. Сушат пластинки строго в горизонтальном положении в течение 18 - 20 часов при комнатной температуре, хранят в эксикаторе.
2.5. Описание определения метилнитрофоса и фенитрооксона в зерне, муке, отрубях, хлебе
2.5.1. Экстракция
Для проведения исследований отбирается средняя проба зерна, муки, отрубей, хлеба весом 1 кг. Из каждой пробы (хлеб измельчают) для анализа методом квартования отбирается три навески по 20 г (из зерна по 50 г). Пробу заливают 50 мл смеси н-гексан - диэтиловой эфир, 7:3, и оставляют на час, периодически встряхивая. Сливают растворитель через фильтр, пробу заливают новой порцией экстрагента и экстрагируют еще час. Объединяют обе порции экстракта, сушат безводным сернокислым натрием в течение 15 мин. и переносят в прибор для отгонки растворителей. Упаривают растворитель до объема ~ 1 мл под вакуумом на ротационном испарителе при температуре бани не более 45 °С, т.к. летучесть МНФ резко увеличивается с повышением температуры. Остатку растворителя дают испариться на воздухе при комнатной температуре. Сухой остаток смывают охлажденным при 0 °С ацетоном и, фильтруя раствор через бумажный фильтр, переносят в мерную пробирку. Оставляют на 15 мин., а затем доводят объем ацетона до 5 мл при комнатной температуре. Из этой пробы проводят определение методом ГЖХ и ТСХЭ.
2.5.2. Метод аналитического определения
2.5.2.1. Газожидкостная хроматография
-10
Условия хроматографирования. Шкала электрометра 2 х 10 А. Скорость
движения ленты самописца 200 мм/час. Температура колонки 190 °С, испарителя
- 220 °С. Расход газа: азота 22 - 24 мл/мин.; водорода 15 - 17 мл/мин.;
воздуха 24 л/час. Вводимый объем 2 - 5 мкл раствора. Линейность
детектирования соблюдается для метилнитрофоса в пределах от 1 до 10 нг, для
фенитрооксона - от 0,5 до 6 нг.
Время удерживания препаратов: метилнитрофос 3,8 мин.; фенитрооксон 3 мин.; время удерживания по метафосу: метилнитрофоса 1,2; фенитрооксона 0,95.
Содержание препаратов в пробе вычисляют по формуле:
C х V х H х 1000
X = ----------------,
V х H х P
а а
где:
X - содержание пестицида в пробе, мг/кг;
C - количество пестицида в стандарте, мкг;
V - объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл;
а
V - общий объем экстракта (5 мл), мл;
H - высота пика пробы, мм;
H - высота пика стандартного раствора, мм;
а
P - масса пробы, взятой для анализа, г.
2.5.2.2. Тонкослойная хроматография с энзимным проявлением
С целью уменьшения краевого эффекта с хроматографической пластинки снимают с краев вдоль направления движения подвижной фазы (со стороны 12 см) по 2 - 3 мм слоя сорбента. Затем вдоль этой же стороны пластинку разделяют полосами на 4 равные части. На 1-ю и 3-ю полосы на расстоянии 1,5 см от нижнего края наносят по 10 мкл стандартных растворов "Б" и "В", т.е. по 0,001 мкг и 0,005 мкг действующих веществ, на 2-ю и 4-ю - 2 и 10 мкл соответственно пробы. Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, в которую налита смесь н-гексан - ацетон, 4:1, за 30 мин. до хроматографирования.
Когда фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают из
камеры и дают растворителю испариться. Пластинку помещают на 1 мин. в
эксикатор, насыщенный парами брома. Затем после удаления избытка брома с
пластинки (~ 60 мин.) ее обрабатывают ферментным раствором и инкубируют в
течение 40 - 50 мин. в насыщенном водными парами термостате при температуре
38 °С (для увлажнения в сушильном шкафу ставят чашку Петри с водой). После
инкубации пластинки опрыскивают проявляющим раствором и помещают в
термостат при 38 °С. Метилнитрофос и фенитрооксон проявляются в течение 10
- 30 мин. в виде белых пятен на голубом фоне, R 0,48 и 0,28
f
соответственно, чувствительность обнаружения каждого 0,001 мкг.
П-нитрокрезол этим методом не обнаруживается. Фенитрооксон может быть также
обнаружен указанным методом, если исключить стадию активации; в этом случае
чувствительность обнаружения метилнитрофоса на 4 порядка ниже.
Количественное определение проводят путем сравнения площади пятна пробы с наиболее близкой к нему по величине площадью стандарта. Пропорциональная зависимость площади пятна от концентрации соблюдается в пределах от 0,001 мкг до 0,01 мкг. Содержание препарата в пробе (мг/кг) рассчитывают по формуле:
а х S х V х 1000
2
X = -----------------,
S х V х P
1 1
где:
а - содержание препарата в стандарте, мкг;
S - площадь пятна стандарта, кв. мм;
1
S - площадь пятна пробы, кв. мм;
2
V - объем экстракта, нанесенного на пластинку, мкл;
1
V - общий объем экстракта, мл;
P - масса пробы, взятой для анализа, г.
2.6. Обработка результатов анализа
Обработка результатов анализа, проведенного методом ГЖХ, приведена в п. 2.5.2.1, методом ТСХЭ - в п. 2.5.2.2.
2.7. Настоящие Методические указания разработаны М.А. Клисенко, М.В. Письменной, ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс, г. Киев.
3. Требования безопасности
Соблюдаются требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами.
4. Литература
Н.Н. Мельников. Химия и технология пестицидов. Изд. "Химия", М., 1974, с. 518.
Остальные материалы раздела: Указы СССР 1917-1992
Предыдущая Методические указания по определению остаточных количеств НЕ-166 в огурцах хроматографией в тонком слое и фотометрическим методом утв. МинСледующая Методические указания по определению метилнитрофоса. фенитрооксона и п-нитрокрезола в зерне и продуктах переработки зерна методом хромат