Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1987 г. N 4388-87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НАБУ В МОРКОВИ МЕТОДОМ
ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны Т.В. Ушаковой, С.В. Тулуповой (ВНИИССОК).
Краткая характеристика препарата приведена в Методических указаниях N 3880-85.
Принцип метода. Метод заключается в проведении реакций превращения ряда
промежуточных продуктов разложения набу в соединение типа M SO , экстракции
2 2
препарата хлороформом, очистке экстракта перераспределением в
несмешивающихся растворителях, дополнительной очистке хроматографией в
тонком слое и количественном определении методом ГЖХ с применением ПИД.
Метрологическая характеристика метода. Минимально детектируемое
количество M SO с ПИД 50 нг. Линейный диапазон определения 50 - 400 нг.
2 2
Нижний предел определения 0,01 мг/кг. Среднее значение определения в пробе
82,0%. Относительная ошибка определения (при p = 0,95, n = 5) составляет
+/- 5,3%.
Реактивы и растворы. Спирт этиловый 96-процентный. Универсальная
индикаторная бумага. Пероксид водорода, 30-процентный раствор.
М-Хлорнадбензойная кислота х.ч. Гидроксид натрия х.ч. Сульфат натрия
безводный х.ч. Хлороформ ч. Пластинки "Силуфол". Гипосульфит натрия ч.д.а.
Хлорид натрия ч.д.а. Едкий натр, 0,05 н раствор. Этилацетат х.ч. Гексан
х.ч. Стандартный раствор M SO (100 мкг/мл) хранится в холодильнике в
2 2
течение недели.
Приборы и посуда. Газожидкостный хроматограф "Хром-4" или другой с ПИД. Аппарат для встряхивания проб. Воронки химические и делительные (ВД-3-250). Испаритель ротационный ИР-1М. Камера для хроматографирования (любой сосуд с притертой крышкой). Автоматические пипетки с дискретными объемами 5; 10; 2050; 100; 200; 500; 1000 мкл. Конические колбы на 100 и 250 мл. Микрошприц на 10 и 100 мкл. Стаканчики. Пробирки вместимостью 5 мл с конусообразным дном.
Хранение проб. Пробы хранятся в течение 1 - 2 дней.
Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. Измельченную пробу моркови (50 г) помещают в коническую колбу на 250 мл, заливают 150 мл смеси этилового спирта с водой (1:1) и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 1 ч. Полученный экстракт фильтруют через бумажный фильтр в колбу на 200 мл. Пробу и фильтр дважды промывают смесью спирта с водой. Далее подкисляют раствор до pH 3,0, промывают 0,5 мл 30-процентного раствора пероксида водорода и помещают в термостат при температуре 50 °C на 15 - 17 ч, после чего к инкубационной смеси добавляют 15 г хлорида натрия и 100 мл гексана. После встряхивания и разделения в делительной воронке гексановый слой отбрасывают. Препарат экстрагируют трижды хлороформом порциями по 10 мл. Объединенный хлороформный слой промывают 100 мл 0,05 н водного раствора едкого натра, содержащего 10 г хлорида натрия. Органическую фракцию фильтруют над безводным сульфатом натрия и затем выпаривают досуха на ротационном испарителе.
Остаток растворяют в 20 - 30 мг хлороформа и добавляют 20 мг М-хлорнадбензойной кислоты. Далее раствор помещают на 30 мин. в термостат при 30 °C. После этого его промывают 30 мл 3-процентного водного раствора гипосульфита натрия, содержащего 3 г хлорида натрия. Водный слой раствора отбрасывают. Органический слой фильтруют над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют его до объема 0,1 - 0,2 мл.
Экстракт количественно переносят на пластинку "Силуфол" размером
2 х 15 см (в пять точек по горизонтали на высоте 15 мм от края пластинки).
Пробу хроматографируют дважды: в начале в системе этилацетат-гексан (3:1),
а затем, после подсушивания, в системе гексан-ацетон (2:1). Величина R
f
препарата при этих условиях хроматографирования составляет 0,20 - 0,25.
Основываясь на этом, с пластинки счищают полосу силикагеля с R 0,18 - 0,40
f
на воронку с бумажным фильтром, затем смывают ацетоном препарат в
конусообразную пробирку вместимостью 5 мл. Растворитель в пробирке
выпаривают досуха, и далее автоматической пипеткой приливают необходимое
количество ацетона в зависимости от предполагаемого содержания гербицида.
Условия хроматографирования. Хроматограф "Хром-4" с ПИД. Стеклянная колонка длиной 1,2 м с внутренним диаметром 3 мм, заполненная 5% OV-210 на хромосорбе N-AW-HCMS (80 - 100 меш). Температура (°C): испарителя - 280, колонки - 270. Скорость потока азота 30 мл/мин., водорода - 34, воздуха - 300 мл/мин. Рабочая шкала электрометра 1:10. Время удерживания 9 мин. 36 с. В колонку хроматографа вводит аликвоту ацетонового раствора (5 - 10 мкл).
Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят путем сравнения рассчитываемого пика с пиком, полученным при введении известного количества стандартного вещества, при условии, что пики близки по величине и определение ведется в диапазоне линейности детектора. Количественную оценку пиков хроматограммы проводят по площади пика.
Количество препарата в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
C V S
ст 2
X = ------,
S V P
ст 1
где:
C - количество препарата во введенном в хроматограф стандартном
ст
растворе, мг;
S и S - площади пика рабочей пробы и стандартного раствора препарата,
ст
введенных в хроматограф, кв. мм;
V - объем экстракта, введенный в хроматограф, мл;
1
V - общий объем экстракта после упаривания, мл;
2
P - масса анализируемой пробы, кг.
Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.