Указы СССР 1917-1992

 

Утверждены

Минздравом СССР

27 апреля 1984 г. N 2999-84

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АМИБЕНА В ПОЧВЕ МЕТОДОМ

ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

 

--------------------------------

<*> Разработаны В.Д. Чмилем, Л.А. Соломко (ВНИИГИНТОКС).

 

    Краткая характеристика препарата.  Амибен - 2,5-дихлор-3-аминобензойная

кислота.  Общепринятое  название - хлорамбен.  Брутто  формула  C H O Cl N.

                                                                 7 5 2  2

Молекулярная  масса  206,04.  Чистое вещество - светло-фиолетовые кристаллы

без запаха с т. пл. 200 - 201 °C. Препарат плохо растворим в воде (0,07% по

массе),  разбавленных  кислотах,  хлороформе,  бензоле  и  четыреххлористом

углероде.   Хорошо   растворим   в   спиртах,  диэтиловом  эфире,  ацетоне,

разбавленных  щелочах. Применяют во время предвсходовой обработки почвы для

борьбы с сорняками на посевах томатов, моркови, сои.

Принцип метода. Метод основан на извлечении амибена из пробы водным раствором гидрокарбоната натрия с последующим определением тонкослойной хроматографией. Для оценки содержания амибена может быть рекомендовано использование денситометра.

Метрологическая характеристика метода. Предел определения амибена в лесостепной и светло-серой суглинистой почве с содержанием гумуса 1,5 - 2,0% - 0,05 мг/кг. Среднее значение определения 76,6%. Стандартное отклонение +/- 6,1%.

    Реактивы и растворы.  Аммиак водный ч.д.а.  Ацетон х.ч.  Нитрат серебра

ч.д.а. н-Гексан ч.  Диэтиловый  эфир  х.ч.  Сульфат натрия безводный ч.д.а.

Гидрокарбонат  натрия ч.д.а. Оксид алюминия нейтральный ч., прокаленный 4 ч

при  600  °C  (сохраняется  над  P O ). Хлороводородная кислота ч. Уксусная

                                  2 5

кислота ледяная  х.ч.  Силикагель КСК, N 2. Силикагель ЛС 5/40 мю для ТСХ с

13% гипса. Сульфат кальция ч.д.а. Хлорид кальция ч. Вода дистиллированная.

Проявляющий реагент: в мерную колбу на 100 мл помещают 0,5 г нитрата серебра, 5 мл дистиллированной воды, 7 мл аммиака и доводят до метки ацетоном. При хранении в плотно закрытой склянке без доступа света годен для применения в течение 1 мес. Стандартный раствор амибена в ацетоне (0,5 мг/мл).

Приборы и посуда. Ротационный вакуумный испаритель. Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Аппарат для встряхивания. Центрифуга лабораторная стационарная. Колбы: мерные на 100 мл; плоскодонные со шлифом на 500 мл; колба Бунзена на 500 мл. Делительные воронки на 500 мл. Баня водяная. Микропипетки. Электроплитка. Сушильный шкаф. Круглодонные колбы на 250 мл со шлифом. Стеклянные пластинки размером 15 х 15 см. Пластинки "Силуфол". Сито капроновое (100 - 120 меш). Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок. Камера для обработки пластинок. Камера хроматографическая. Эксикатор. Источники УФ-света. Воронка Бюхнера диаметром 13 см. Фильтр стеклянный N 4.

Подготовка к анализу. Приготовление хроматографических пластинок. Гипс (14 г) и сульфат кальция (1 г) смешивают с 50 мл дистиллированной воды в течение 10 мин. Сорбционную массу (5 - 7 г) равномерно наносят на одну пластинку (9 х 12 см) и сушат при комнатной температуре 12 ч. Затем пластинки активируют в сушильном шкафу при 120 °C в течение 1 ч и хранят в эксикаторе над слоем хлорида кальция.

    Ход анализа. Воздушно-сухую почву (100 г), растертую и просеянную через

сито   с   размером  отверстий  1  мм,  помещают  в  плоскодонную  колбу  с

пришлифованной  пробкой на 500 мл, приливают 100 мл 0,03 М водного раствора

гидрокарбоната  натрия и экстрагируют амибен на аппарате для встряхивания в

течение  30  мин.  Затем содержимое колбы переносят в центрифужный стакан и

центрифугируют  в  течение  5 мин. Вместо центрифугирования можно проводить

фильтрование  под  вакуумом  через  фильтр  из  стеклоткани. Водный раствор

сливают,  к  остатку  в  стакане  добавляют  50  мл 0,03 М водного раствора

гидрокарбоната   натрия,  перемешивают  и  снова  центрифугируют.  Операцию

повторяют  еще дважды. Объединенный водный экстракт переносят в делительную

воронку  на  500  мл,  подкисляют хлороводородной кислотой до pH 1 и трижды

экстрагируют   амибен  диэтиловым  эфиром  (порциями  100;  50  и  50  мл).

Объединенный  эфирный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия и затем

фильтруют   через  1  г  оксида  алюминия  (нейтрального),  помещенного  на

стеклянный  фильтр  N  4  (диаметр 2,5 см). Затем амибен элюируют из оксида

алюминия  50  мл  0,03  М  водного  раствора  гидрокарбоната  натрия. Элюат

помещают в делительную воронку, подкисляют хлороводородной кислотой до pH 1

и  трижды экстрагируют амибен диэтиловым эфиром (порциями 340; 25 и 25 мл).

Объединенный  эфирный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10

г)  и  упаривают  на ротационном испарителе до объема 0,5 - 1,0 мл. Остаток

количественно    наносят   на   хроматографическую   пластинку   "Силуфол",

предварительно очищенную в растворе аммиака и затем выдержанную в сушильном

шкафу  при 120 °C в течение 15 мин. Можно использовать и пластинки с тонким

слоем  силикагеля,  приготовленные  в  лабораторных  условиях.  На  эту  же

пластинку  наносят  1;  5 и 10 мкг амибена и проводят хроматографирование в

системе  растворителей  гексан-диэтиловый эфир-уксусная кислота (25:25:1) в

камере,  насыщенной  в  течение  2  ч  парами  подвижных растворителей. Для

насыщения   стенки   камеры  обкладывают  фильтровальной  бумагой,  которая

пропитывается  смесью  подвижных  растворителей.  После  окончания процесса

хроматографирования  пластинку  извлекают  из  хроматографической  камеры и

сушат  на  воздухе  в  вытяжном  шкафу.  Для  обнаружения амибена пластинку

обрабатывают проявляющим реагентом, сушат и облучают УФ-светом 10 - 15 мин.

Амибен обнаруживается в виде темных пятен на белом фоне с величиной R  0,60

                                                                     f

+/- 0,01. Минимально обнаруживаемое количество на хроматограммах 1 мкг.

Обработка результатов анализа. Оценка содержания амибена в пробе проводится путем визуального сравнения размера и интенсивности окраски пятен стандартов с пятнами пробы. Содержание амибена в почве (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

 

                                     100A

                                 X = ----,

                                      P

 

где:

A - количество амибена в пробе, найденное визуальным сравнением со стандартом, мг;

P - масса пробы, кг.

Требования безопасности. Соблюдают правила безопасности, рекомендованные при работе с пестицидами и химическими реактивами.