Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
27 ноября 1984 г. N 3154-84
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИИ
АНОМЕТРИНА-Н В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
I. Краткая характеристика препарата
Анометрин-Н - отечественный препарат из группы синтетических пиретроидов. Растворим в большинстве органических растворителей.
CH CH
3\ / 3
\/
/\ Мол. масса 391,2.
H----------H O
/ \ // \/ \// \
Cl C=CH C -O-CH ──│ ││ │ ││
2 ││ 2 \\ / \\ /
O
3-феноксибенолл-2,2-диметил-3-(2,2-дихлорвизил)-циклопропанкарбоксилат.
При применении может находиться в виде аэрозоля.
I. Характеристика метода
1. Определение основано на хроматографировании анометрина-Н на неподвижной фазе SE-30 с детектором постоянной скорости рекомбинации (ДПР) или в тонком слое силикагеля с последующим обнаружением зон локализации препарата путем обработки раствором нитрата серебра.
2. Отбор проб проводится с концентрированием (бумажный фильтр "синяя лента" или стеклянный фильтр с пористой пластиной).
3. Предел измерения в анализируемом объеме пробы: ГЖХ - 3 нг, ТСХ - 3 мкг.
4. Предел измерения в воздухе (при отборе 40 л воздуха):
ГЖХ - 0,05 мг/куб. м, ТСХ - 0,1 мг/куб. м.
5. Диапазон измеряемых концентраций: ГЖХ - 0,05 - 0,5 мг/куб. м, ТСХ - 0,1 - 0,5 мг/куб. м.
6. Определению не мешают наполнители технического препарата, хлор-, фосфорорганические пестициды.
7. Границы суммарной погрешности: ГЖХ - +/- 13,8%, ТСХ - +/- 20%.
8. ОБУВ - 0,3 мг/куб. м.
II. Реактивы, растворы, материалы
Ацетон ч, ГОСТ 2603-79.
Гептан ч, ТУ 6-09-3375-78.
Диэтиловый эфир хч, ГОСТ 6262-79.
Сульфат натрия безводный свежепрокаленный, ГОСТ 4166-76.
Фильтры бумажные "синяя лента", ТУ 6-09-1678-77.
Аммиак 25% водный, ГОСТ 3760-79.
Нитрат серебра, ГОСТ 1277-81, хч.
Пластинки "Силуфол"(ЧССР).
Подвижная фаза - гексан - ацетон (95:5).
Проявляющий реагент: 0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл аммиака и доводят объем до 100 мл ацетоном. Хранят в темном месте. Для обработки 1 пластинки берут 7 - 10 мл раствора.
Стандартный раствор анометрина-Н N 1, содержащий 100 мкг/мл вещества, готовят растворением 10 мг препарата в мерной колбе с притертой пробкой в 100 мл гексана. Хранят в холодильнике не более 2 месяцев.
К методу ГЖХ:
Неподвижная фаза - 5% SE-30, нанесенная на Хроматом N-AW (0,16 - 0,20 мм).
Азот газообразный особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Стандартный раствор N 2. Для приготовления раствора с концентрацией 2 мкг/мл вносят 5 мл раствора N 1 в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки гексаном. Хранят в холодильнике не более 2-х недель.
III. Приборы и посуда
Электроаспиратор для отбора проб воздуха, ТУ 64-1-862-77.
Фильтродержатели.
Стеклянный фильтр с пористой пластиной (фильтр Шотта) N 2 (40 мк).
Ротационный вакуумный испаритель для отгонки растворителей.
Водяная баня, ТУ 46-22-608-75.
Колбы конические емкостью 100 мл, ГОСТ 10394-72.
Колбы грушевидные емкостью 50, 100 мл, ГОСТ 10394-72.
Воронки химические, диаметр 6 см, ГОСТ 8613-75.
Колбы мерные на 25, 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74.
К методу ТСХ:
Пластинки для хроматографии "Силуфол" (ЧССР).
Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-74.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.
К методу ГЖХ:
Хроматограф с детектором постоянной скорости рекомбинации (ДПР) или с детектором по захвату электронов (ДЗЭ) (марки "Цвет", "Газохром" или др.).
Микрошприцы на 10 мкл.
Колонка стеклянная, длина 0,5 м, диаметр 3 мм.
Секундомер.
IV. Условия отбора проб воздуха
Воздух со скоростью 2 л/мин. аспирируют через помещенный в фильтродержатель бумажный фильтр "синяя лента" (или стеклянный фильтр Шотта) в течение 20 мин. Длительность хранения пробы в холодильнике не более 2-х суток.
V. Условия анализа
Бумажный фильтр, содержащий аэрозоль, из фильтродержателя переносят в коническую колбу и заливают 30 мл смеси гексан - ацетон (9:1). Экстрагируют пестицид из фильтра в течение 30 мин. Экстракт сушат безводным сульфатом натрия, сливают в колбу ротационного испарителя и концентрируют до объема ~ 0,1 - 0,2 мл при температуре бани не выше 50 °C. Досуха испаряют на воздухе. Сухой остаток растворяют в 1 мл гексана и проводят определение методами ГЖХ и ТСХ.
Если для поглощения аэрозоля использован стеклянный фильтр с пористой пластиной, то поверхность фильтра смывают дважды по 20 мл смеси гексан - ацетон (9:1), тщательно обмывая стенки фильтра. Сливают экстракт через слой сульфата натрия в колбу для отгонки растворителей. Концентрируют так, как описано выше, и далее проводят определение методами ТСХ и ГЖХ.
Определение методом ГЖХ
Детектор постоянной скорости рекомбинации.
Колонка стеклянная 0,5 м, внутренний диаметр - 3 мм.
Твердый носитель - Хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм).
Жидкая фаза - 5% SE-30.
Температура термостата колонки 220 °C.
Температура испарителя 230 °C.
Температура термостата детектора 250 °C.
Газ-носитель - азот особой чистоты.
Скорость азота 70 мл/мин.
Скорость диаграммной ленты 240 мм/час.
Объем вводимой пробы 5 мкл.
-12
Шкала 20 x 10 А.
Линейный диапазон детектирования - 2 - 15 нг.
Время удерживания - 2,72 мин.
Количественное определение препарата проводят по методу абсолютной калибровки.
Концентрацию препарата (X) в воздухе в мг/куб. м рассчитывают по формуле:
G x V x S
1 пр
X = -------------,
S x V x V
ст 20
где:
G - количество препарата во введенном в хроматограф стандартном
растворе, мкг;
S - площадь пика стандартного раствора препарата, введенного в
ст
хроматограф, кв. мм;
S - площадь пика препарата в используемом растворе пробы, кв. мм;
пр
V - общий объем пробы, мл;
1
V - объем экстракта, введенный в хроматограф, мл;
V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным
20
условиям, л.
Определение методом ТСХ
Пробу, сконцентрированную до объема 0,2 - 0,3 мл, количественно наносят при помощи капиллярной пипетки на хроматографическую пластинку, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки. Колбу с экстрактом 2 - 3 раза смывают порциями диэтилового эфира, который также наносят в центр пятна. Справа и слева от пробы наносят серию стандартных растворов пестицида, содержащих 2 мкг, 3 мкг, 10 мкг препарата.
Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую
камеру, в которую за 30 мин. до хроматографирования налита смесь
гептан - ацетон (98:2). После хроматографирования пластинку высушивают на
воздухе, после чего обрабатывают из пульверизатора проявляющим реагентом,
подсушивают и подвергают УФ-облучению в течение 15 - 20 мин. Анометрин-Н
проявляется в виде двух пятен (цис- и трансизомеры) серо-черного цвета.
Величины R - 0,33 и 0,45.
f
Количество препарата в пробе определяют сравнением интенсивности окраски и площадей пятен пробы и стандартного раствора. Строится градуировочный график зависимости площади от количества препарата в мкг и интенсивности окраски пятна. Прямолинейная зависимость между площадью и интенсивностью окрашивания пятна и содержанием препарата в пятне соблюдается в интервале 2 - 10 мкг. Если содержание препарата в пробе превышает верхнюю границу диапазона (10 мкг), то для хроматографирования необходимо брать аликвотную часть экстракта (0,1, 0,2 мл и т.д.) параллельной пробы.
Концентрацию препарата (Х) в воздухе в мг/куб. м рассчитывают по формуле:
G x V
1
X = -------,
V x V
20
где:
X - количество препарата, найденное в хроматографируемом объеме пробы,
мкг;
V - общий объем пробы, мл;
1
V - объем пробы, взятый для хроматографирования, мл;
V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным
20
условиям, л.
VI. Требования безопасности
Выполняются в соответствии с "Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санэпидучреждений системы МЗ СССР", N 2455-81 от 20.10.81.