Путь:
Навигация
- Декреты СССР 1917-1992
- Законы СССР 1917-1992
- Инструкции СССР 1917-1992
- Обращения СССР 1917-1992
- Письма СССР 1917-1992
- Положения СССР 1917-1992
- Постановления СССР 1917-1992
- Правила СССР 1917-1992
- Приказы СССР 1917-1992
- Прочие СССР 1917-1992
- Распоряжения СССР 1917-1992
- Указы СССР 1917-1992
- Циркуляры СССР 1917-1992
Язык [ РУССКИЙ ]
Новые материалы
- Геноцид собственного народа или зеленская чума 21 века 2024-04-27
- Бизнес-ланч как организовать обед с выгодой 2024-03-23
- Болезни, которые успешно лечатся в современных клиниках 2024-03-10
- Пополнить Steam Пополнение Счета через Steam 2024-03-05
- 10 способов оптимизации пространства в маленькой ванной 2024-02-03
- Магия звука выберите подходящий музыкальный инструмент для вашего творчества 2024-01-22
- Куда можно поехать отдохнуть в России 2024-01-22
- Преимущества доставки еды комфорт, разнообразие и экономия времени 2024-01-14
- Все что нужно знать о покупке земли 2024-01-14
- NATO-УГРОЗА СТАБИЛЬНОСТИ И БЕЗОПАСНОСТИ УКРАИНЫ 2023-12-05
- Займ Бесплатно на Карту Онлайн. Финансовая Гибкость и Удобство в Одном Клике 2023-11-30
- Преимущества краткосрочного займа на карту 2023-11-27
- Украине уже пора снять розовые очки и оценить, что значит война, нацизм и терроризм 2023-11-03
- юрии 0000-00-00
- Понимание основ охраны труда 2023-10-11
Картинка недели
Указы СССР 1917-1992
Категории
Методические указания по определению карбина и хлор-ИФК в биологических средах спектрофотометрическим методом и методом тонкослойной хр
Дата публикации: До 2014-05-28Просмотров: 751
Материал приурочен к дате: 1989-06-08
Прочие материалы относящиеся к: Дате 1989-06-08 Материалы за: Год 1989
Автор: Мета Гость
Утверждены
Минздравом СССР
8 июня 1989 г. N 4998-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ КАРБИНА И ХЛОР-ИФК В БИОЛОГИЧЕСКИХ
СРЕДАХ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ И МЕТОДОМ
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны Л.Г. Александровой (КНИИГГ и ПЗ).
Краткая характеристика препаратов. Карбин (барбан) - действующее начало
O-(4-хлорбутил-2-ил-1)-N-(3-хлорфенил)карбамат. Брутто формула C H O NCl .
11 9 2 2
Молекулярная масса 258,2. Химически чистый карбин - белое кристаллическое
вещество, т. пл. 75 - 76 °C (с разложением). Растворимость: в бензоле - 370
г/кг, толуоле - 295, дихлорэтане - 546, хлороформе - 470, пропиленгликоле -
150, н-гексане - 2 г/кг, в воде - 11 мг/л при 25 °C. Давление насыщенных
паров 0,067 Па. Для белых мышей и кроликов ЛД 600 - 820 мг/кг. Следует
50
соблюдать меры предосторожности, исключающие попадание пестицида на кожу. В
воздухе рабочей зоны ПДК 0,5 мг/куб. м, в воде 0,03 мг/л. МДУ в СССР в
зерновых 1 мг/кг, овощах и фруктах 0,1 мг/кг.
Хлор-ИФК (хлорпрофам) - действующее начало O-изопропил-N-
(3-хлорфенил)карбамат. Брутто формула C H O NCl. Молекулярная масса
10 12 2
213,7. Химически чистый хлор-ИФК - белое кристаллическое вещество, т. пл.
41,4 °C, т. кип. 112 - 113 °C при 200 Па. Хорошо растворим в большинстве
органических растворителей, растворимость в воде - 89 мг/л при 25 °C. Для
экспериментальных животных ЛД 1500 - 3300 мг/кг. Не раздражает кожу. В
50
воздухе рабочей зоны ПДК 2 мг/куб. м, в воде водоемов - 1 мг/л. В моркови
МДУ 0,05 мг/кг.
Карбин и хлор-ИФК применяют в качестве гербицидов.
Принцип метода. Метод основан на извлечении пестицидов из биоматериала
органическим растворителем и хроматографировании в тонком слое оксида
алюминия или силикагеля в подвижной фазе на основе н-гексана. Зоны
локализации пестицидов обнаруживают по реакции азосочетания продуктов их
термической деструкции с альфа-нафтолом. Для спектрофотометрического
определения используют характеристическое поглощение гексановых растворов
карбина и хлор-ИФК в ультрафиолетовой области спектра при
лямбда = 276 - 278 и 274 нм соответственно для карбина и хлор-ИФК.
макс
Метрологическая характеристика метода. Нижний предел обнаружения: методом ТСХ - карбина 1 - 2 мкг (0,05 - 0,1 мг/кг), хлор-ИФК 1,5 - 3 мкг (0,075 - 0,15 мг/кг); методом УФ-спектрофотометрии - карбина 3 мкг, хлор-ИФК 5 мкг в 3 мл раствора (0,5 и 0,85 мг/л соответственно).
Среднее значение определения и доверительный интервал среднего (p = 0,95, n = 10): методом ТСХ - карбина в тканях внутренних органов 90,6 +/- 10,8% и в крови 94,0 +/- 11,0%, хлор-ИФК в тканях 88,0 +/- 10,3%, в крови 90,0 +/- 12,5%методом УФ-спектрофотометрии - карбина 96,7 +/- 3,9% и хлор-ИФК 92,4 +/- 9,3%.
Избирательность метода. Определению карбина и хлор-ИФК не мешает фосфор и хлорорганические пестициды, применяемые на одинаковых сельскохозяйственных культурах.
Реактивы и растворы. Карбин х.ч. Хлор-ИФК х.ч. н-Гексан нормальный ч.
Диэтиловый эфир х.ч. или "медицинский для наркоза". Хлороформ х.ч. Оксид
водорода. Гидроксид натрия ч.д.а., 25-процентный раствор. Нитрит натрия
х.ч. Лимоннокислый натрий х.ч., 5-процентный раствор. Сульфат натрия
безводный ч.д.а. Нитрат серебра х.ч., 2-процентный раствор. Гидроксид
калия ч.д.а. Бромфеноловый синий ч.д.а., о-толидин ч. Оксид алюминия для
хроматографии II степени активности ч. Сульфат кальция безводный ч.д.а.
альфа-Нафтол ч.д.а. Хлороводородная кислота концентрированная х.ч. Фенол.
Аммиак водный, ч.д.а. Проявляющие реагенты: N 1 (для диазотирования) -
нитрит натрия (к 1,5 г нитрита натрия приливают раствор, состоящий из 46 мл
дистиллированной воды и 4 мл концентрированной хлороводородной кислоты).
Применяют свежеприготовленным; N 2 (для азосочетания) - гидроксид калия
(2,8 г растворяют в 50 мл дистиллированной воды и прибавляют 0,2 г
альфа-нафтола). Реактивы готовят перед употреблением; N 3 - бромфеноловый
синий реагент (к 0,5 г бромфенолового синего приливают 10 мл ацетона и
разбавляют до 50 мл 2-процентным раствором нитрата серебра). Раствор можно
хранить в холодильнике несколько дней, N 4 - на основе о-толидина. Готовят
раствор А: 0,5-процентный раствор о-толидина в ацетоне. Раствор Б:
смешивают 3 объема 0,5-процентного раствора гидроксида натрия и 2 объема
3-процентного раствора пероксида водорода. Перед употреблением смешивают
равные объемы растворов А и Б. Стандартные растворы карбина и хлор-ИФК в
диэтиловом эфире с содержанием 100 мкг/мл и гексане с содержанием
100 мкг/мл. Хранят в холодильнике до 1 мес. Пластинки "Силуфол" размером
15 x 15 см (УФ ). Хлорамин Б.
254
Приборы, аппаратура, посуда. Аппарат для встряхивания, ротационный испаритель с набором колб. Спектрофотометр, позволяющий проводить измерения в УФ-области спектра, начиная с 220 нм. Колбы на 250 мл; грушевидные для отгонки растворителя; мерные; цилиндры. Воронки делительные на 250 мл. Пробирки мерные на шлифах вместимостью 10 мл. Камера хроматографическая. Пульверизатор стеклянный. Камера для опрыскивания пластинок. Микропипетки или капилляры для нанесения проб. Источник УФ-света. Стеклянные пластинки размером 9 x 12 или 15 x 15 см. Гомогенизатор. Адсорбционные колонки стеклянные размером 300 x 15 мм. Фарфоровые чашки и ступки.
Подготовка к определению. Приготовление хроматографических пластинок. Навеску оксида алюминия (50 г) смешивают с 5 г сернокислого сульфата кальция (или гипса), тщательно растирают в ступке до однородной массы. Смесь переносят в колбу на 250 мл и порциями приливают 75 мл воды, осторожно встряхивая массу. Полученную смесь встряхивают до однородной консистенции, а затем ровным тонким слоем наливают на 10 - 12 пластинок размером 9 x 12 см (или 8 - 10 пластинок размером 15 x 15 см). Оставляют при комнатной температуре на 10 - 12 ч. Хранят в эксикаторе.
Приготовление адсорбционной колонки. В колонку помещают небольшой тампон из гигроскопической обезжиренной ваты (0,5 г), насыпают слой оксида алюминия на высоту колонки 2 - 3 см (примерно 3 - 4 г). Через колонку пропускают 30 мл ацетона.
Ход анализа. Экстракция для метода ТСХ. Пробу тканей внутренних органов (20 г) тщательно измельчают (или гомогенизируют), приливают 50 мл эфира и энергично встряхивают (при охлаждении льдом) в течение 1 ч. Экстракт сливают. Оставшуюся массу промывают свежей порцией эфира 20 мл. Экстракты объединяют, фильтруют через бумажный фильтр и отгоняют растворитель досуха. К сухому остатку приливают 5 мл охлажденного ацетона и пропускают через абсорбционную колонку. Элюируют пестициды охлажденным ацетоном (50 мл). Ацетон отгоняют досуха, к сухому остатку приливают 0,5 мл эфира и наносят на хроматографическую пластинку.
Пробу крови (2 мл) вносят в пробирку, предварительно смоченную раствором лимоннокислого натрия, и приливают 10 мл эфира. Встряхивают 20 мин. После 10-минутного отстаивания встряхивают повторно 10 мин. Экстракт сливают и отгоняют растворитель до объема 0,2 - 0,5 мл.
Экстракция для УФ-спектрофотометрии. Пробу крови (2 мл) вносят в пробирку, предварительно смоченную раствором лимоннокислого натрия. Наливают 5 - 6 мл гексана и встряхивают 20 мин., поместив в стакан со льдом. После 10-минутного отстаивания гексан осторожно сливают. К оставшейся массе приливают свежую порцию гексана (5 мл). Встряхивают 10 мин. Экстракты объединяют, фильтруют через бумажный фильтр, на который предварительно насыпают безводный сульфат натрия. Измеряют объем раствора. Для спектрофотометрирования отбирают 3 мл.
Хроматографирование. Эфирный экстракт 0,2 - 0,5 мл вносят на
хроматографическую пластинку на стартовую линию. Параллельно слева и справа
от пробы наносят смеси стандартных растворов карбина и хлор-ИФК, содержащие
1, 2, 5, 10, 15... 40 мкг исследуемого вещества. Пластинку помещают в
хроматографическую камеру, куда за 30 мин. до хроматографирования наливают
смесь гексана с хлороформом (1:3). После достижения фронтом растворителя
высоты 10 см пластинку извлекают из хроматографической камеры и оставляют
на воздухе до полного испарения следов растворителей. Затем ее помещают в
сушильный шкаф на 10 - 15 мин. при 150 - 160 °C. Охлажденную до комнатной
температуры пластинку опрыскивают сначала реагентом N 1, а через 1 мин. -
N 2. В местах локализации карбина и хлор-ИФК проявляются пятна, окрашенные
в розово-кирпичный цвет. Кроме карбина и хлор-ИФК, на пластинке могут
проявиться продукты метаболизма: оксикарбамат (метаболит карбина,
R 0 - 0,1), анилин и м-хлороанилин. Если величину R карбина принять
f f
равной 1, то R для анилина равна 1,25; для м-хлоранилина - 1,49, а для
отн
хлор-ИФК - 2.
При опрыскивании пластинок ПР N 3 карбин и хлор-ИФК проявляются в виде коричневых пятен. После обработки ПР N 4 и УФ-облучения карбин, хлор-ИФК и метаболиты проявляются в виде серо-зеленых пятен.
Количественное определение пестицидов проводят путем сопоставления интенсивности окрашивания пятен и их площади на хроматограмме пробы и стандартных растворов. Площадь пятен измеряют с помощью промасленной миллиметровой бумаги или планиметром.
Обнаружение п-аминофенола. Качественным признаком интоксикации N-фенилкарбаматами служит присутствие в моче п-аминофенола. Его обнаруживают по реакции окисления до 4-хлорамина-п-хинона и последующего сочетания с фенолом в щелочной среде. В результате получается окрашенное соединение.
Пробу мочи 20 мл вносят в делительную воронку, приливают 20 мл 1 н раствора соляной кислоты и интенсивно встряхивают 10 мин. Затем вносят 5 мг хлорамина Б и снова встряхивают содержимое воронки 10 мин. Приливают 30 мл эфира и осторожно встряхивают 20 мин. для экстракции 4-хлорамина-п-хинона. Эфирный экстракт отделяют, пропускают через безводный сульфат натрия, концентрируют до объема 0,2 - 0,5 мл и наносят полученную пробу на фильтровальную бумагу, заранее смоченную эфирным раствором фенола. Выдерживают в парах аммиака 1 - 2 мин. Если в пробе мочи содержался п-аминофенол, то на фильтровальной бумаге проявляется пятно, окрашенное в голубой или синий цвет в зависимости от количества п-аминофенола.
Спектрофотометрирование. Для спектрофотометрирования в кварцевые кюветы
l = 1 см вносят 3 мл гексанового экстракта. Измеряют оптическую плотность
раствора при лямбда = 274 нм для хлор-ИФК и лямбда = 276 - 278 нм
макс макс
для карбина. Максимум при 230 - 231 нм принадлежит анилину, при 234 нм -
оксикарбамату, при 237 нм - м-хлоранилину. Количество пестицида в
спектрофотометрируемой пробе определяют по градуировочному графику, для
чего измеряют оптические плотности растворов пестицидов, содержащие от 3 до
100 мкг в 3 мл гексана. Строят график зависимости "Оптическая плотность -
концентрация в 3 мл". Эталоном сравнения служит гексан.
Обработка результатов анализа. Содержание пестицида в пробе (X, мкг/г или мг/кг) вычисляют по формуле:
AV
X = ---,
V P
1
где:
A - количество пестицида, найденное в хроматографируемой или спектрофотометрируемой пробе, мкг;
V - общий объем экстракта, мл;
P - навеска или объем пробы, г или мл.
Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.
Остальные материалы раздела: Указы СССР 1917-1992
Предыдущая Временные методические указания по определению баста и его метаболитов в яблоках. бананах. семенах рапса методом газожидкостной хроматогСледующая Методические указания по определению ронита и его метаболитов в биологических средах методами тонкослойной и газожидкостной хроматограф