Путь:
Навигация
- Декреты СССР 1917-1992
- Законы СССР 1917-1992
- Инструкции СССР 1917-1992
- Обращения СССР 1917-1992
- Письма СССР 1917-1992
- Положения СССР 1917-1992
- Постановления СССР 1917-1992
- Правила СССР 1917-1992
- Приказы СССР 1917-1992
- Прочие СССР 1917-1992
- Распоряжения СССР 1917-1992
- Указы СССР 1917-1992
- Циркуляры СССР 1917-1992
Язык [ РУССКИЙ ]
Новые материалы
- Геноцид собственного народа или зеленская чума 21 века 2024-04-27
- Бизнес-ланч как организовать обед с выгодой 2024-03-23
- Болезни, которые успешно лечатся в современных клиниках 2024-03-10
- Пополнить Steam Пополнение Счета через Steam 2024-03-05
- 10 способов оптимизации пространства в маленькой ванной 2024-02-03
- Магия звука выберите подходящий музыкальный инструмент для вашего творчества 2024-01-22
- Куда можно поехать отдохнуть в России 2024-01-22
- Преимущества доставки еды комфорт, разнообразие и экономия времени 2024-01-14
- Все что нужно знать о покупке земли 2024-01-14
- NATO-УГРОЗА СТАБИЛЬНОСТИ И БЕЗОПАСНОСТИ УКРАИНЫ 2023-12-05
- Займ Бесплатно на Карту Онлайн. Финансовая Гибкость и Удобство в Одном Клике 2023-11-30
- Преимущества краткосрочного займа на карту 2023-11-27
- Украине уже пора снять розовые очки и оценить, что значит война, нацизм и терроризм 2023-11-03
- юрии 0000-00-00
- Понимание основ охраны труда 2023-10-11
Картинка недели
Указы СССР 1917-1992
Категории
Методические указания по определению бета-экзотоксина в препаратах битоксибациллина утв. Минздравом СССР 30.03.1981 N 2353-81
Дата публикации: До 2014-05-28Просмотров: 673
Материал приурочен к дате: 1981-03-30
Прочие материалы относящиеся к: Дате 1981-03-30 Материалы за: Год 1981
Автор: Мета Гость
Утверждены
Минздравом СССР
30 марта 1981 г. N 2353-81
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БЕТА-ЭКЗОТОКСИНА
В ПРЕПАРАТАХ БИТОКСИБАЦИЛЛИНА
Краткая характеристика препарата. Битоксибациллин - бактериальный инсектицидный препарат, получаемый микробиологическим путем на основе культуры Bacillus thuringiensis Var. thuringiensis. Препарат предназначен для борьбы с колорадским жуком и хлопковой совкой. В его состав входят спорокристаллический комплекс, бета-экзотоксин, а также остатки среды, наполнитель (каолин) и хлорид натрия. Бета-экзотоксин представляет собой 2-0-(4-0-5-L-дезоксиаденозин-5-ил-D-глюкопиранозил)-4-O-фосфо-D-алларовую кислоту. Молекулярная масса для свободной кислоты бета-экзотоксина 701.
Принцип метода. В основе метода лежит использование анионообменной хроматографии с применением градиента элюции.
Метрологическая характеристика метода. Чувствительность метода позволяет определять 1 мкг и более бета-экзотоксина в пробе. Время анализа 50 мин., время выхода бета-экзотоксина 34 мин. Величина стандартного отклонения не более +/- 4%.
Реактивы и материалы. Анионообменная смола с размером зерен 10 +/- 2 мкм или любой анионообменник, обладающий аналогичными характеристиками. Стандартный образец с известным процентным содержанием бета-экзотоксина. Хлороводородная кислота особой чистоты. Хлорид натрия особой чистоты. Вода дистиллированная деионизационная. Едкий натр особой чистоты. Универсальная индикаторная бумага, pH 1 - 10 ("Реагент"). Фильтры "красная лента".
Приготовление рабочих растворов. Раствор а - 600 мг хлорида натрия и 5 мл 1 н хлороводородной кислоты помещают в мерную колбу на 2 л, растворяют в небольшом количестве деионизованной воды и доводят до метки той же водой. Раствор б - 11,7 г хлорида натрия и 10 мл 1 н хлороводородной кислоты помещают в мерную колбу на 1 л, растворяют в небольшом количестве деионизованной воды и доводят до метки той же водой. Перед использованием растворы дегазируются с помощью водоструйного насоса в течение 10 мин.
Приготовление деионизованной воды. Деионизованную воду получают путем пропускания дистиллированной воды через ионообменную колонку, заполненную смесью катионита и анионита, с последующим контролем кондуктометром, показания которого должны быть 1,5 МОм/см.
Приготовление раствора стандартного образца бета-экзотоксина. Навеску 20 мг стандартного образца с известным содержанием бета-экзотоксина, взятую с точностью до 0,0001 г, растворяют в 5 мл деионизованной воды. Из этого раствора готовят растворы для калибровки колонки, делая разведения его в 2, 4 и 8 раз. Готовые растворы до использования хранят в холодильнике. Срок хранения не более недели.
Приборы и посуда. Жидкостный хроматограф высокого давления. Микрошприцы на 10 и 100 мкл для жидкостной хроматографии. Весы аналитические. Водоструйный насос. Колбы мерные на 1 и 2 л; конические на 100 мл. Воронки химические; пипетки на 1, 2, 5 и 10 мл. Стеклянные фильтры N 3 или 4. Стаканы химические на 100 мл. Пробирки химические. Пробки резиновые.
Подготовка к определению. Подготовка колонки. Анионообменную
-
смолу типа 2632 переводят в хлор-форму (Cl ). Для этого смолу
помещают в химический стакан на 100 мл и заливают 10-кратным
(объем/объем) количеством 1 н раствора NaOH на 30 мин. Суспензию
помещают на стеклянный фильтр N 3 или 4 и на фильтре под слабым
вакуумом промывают деионизованной водой до pH, равного pH воды,
контролируя с помощью индикаторной бумаги. Суспензию вновь
переносят в химический стакан и заливают 1 н HCl на 30 мин.
Промывку водой до pH воды проводят, как описано выше. Такую
обработку смолы проводят дважды.
Подготовленную суспензию разбавляют раствором а в соотношении по объему 1:1 и дегазируют. Полученной суспензией смолы заполняют термостатированную (50 °C) колонку размером 1,6 x 150 мм и проводят упаковку ее при скорости потока раствора а 1 мл/мин. в течение 30 мин. Колонка считается готовой к работе, если перо самописца устойчиво выписывает базовую линию.
Регенерация колонки. После каждого анализа колонку регенерируют последовательным промыванием в течение 10 мин. сначала раствором б, затем а. Показателем готовности колонки служит устойчивая базовая линия.
Срок годности колонки составляет 50 - 70 анализов. Градуируют колонку после каждой новой упаковки ее. Отработанные партии смолы собирают и затем обрабатывают так, как указано выше.
Градуировка колонки. Хроматографический процесс проводят при следующем режиме: колонка термостатирована при 50 °Cскорость элюции 18 мл/ч; элюция проходит в градиенте концентраций растворов а и б; детектирование бета-экзотоксина осуществляется при длине волны 260 нм; время удерживания бета-экзотоксина 34 мин.
При указанном режиме проводят по 5 анализов каждого из полученных разведений, включая исходный раствор стандартного образца. Для этого в колонку вносят микрошприцем такое количество раствора, чтобы в нем содержалось 20 - 30 мкг бета-экзотоксина (рассчитывается).
Ход анализа. Подготовка образца битоксибациллина к анализу. Навеску битоксибациллина 0,5 г, взятую с точностью до 0,0001 г, заливают 5 мл деионизованной воды и, периодически встряхивая, выдерживают 30 мин. Фильтруют и осадок промывают 5 мл деионизованной воды. Фильтраты объединяют, осадок выбрасывают.
Определение бета-экзотоксина в водном растворе битоксибациллина. Подготовленный водный экстракт (10 мкл) вносят в хроматографическую колонку с помощью микрошприца. Анализ проводят при условиях, указанных выше. В случае получения "зашкаленного" пика бета-экзотоксина анализ повторяют, вносят меньшее количество испытуемого раствора.
Построение градуировочной кривой. На основе данных, полученных при градуировке колонки, строят градуировочную кривую, откладывая на оси абсцисс усредненную площадь пика каждого разведения, а на оси ординат - соответствующее расчетное количество внесенного бета-экзотоксина. При концентрации бета-экзотоксина в наносимом образце от 1 до 100 мкг градуировочная кривая линейна.
Расчет градуировочного коэффициента. Градуировочный коэффициент (K, мкл/кв. мм) определяют по формуле:
C
K = -,
S
где:
C - количество экзотоксина (расчетное), внесенное в колонку, мкг;
S - площадь пика, кв. мм, которую вычисляют по формуле:
W
S = - x H,
2
где:
H - высота пика, мм;
W / 2 - ширина пика на половине высоты, мм.
Расчет содержания бета-экзотоксина в битоксибациллине. Содержание бета-экзотоксина (C, %) вычисляют по формуле:
100SK
C = -----,
A
где:
S - площадь пика (см. формулу (2));
K - градуировочный коэффициент (см. формулу (1)), мкл/кв. мм;
A - концентрация растворенного образца, мг/мл или мкг/мкл.
Техника безопасности. При работе необходимо соблюдать требования, обычно предъявляемые для работы с химическими реагентами и хроматографами.
Остальные материалы раздела: Указы СССР 1917-1992
Предыдущая Методические указания по определению гранул вируса гранулеза яблонной плодожорки на растительных объектах иммунофлюоресцентным методомСледующая Методические указания по определению видата в растительной продукции. почве и воде методом тонкослойной хроматографии утв. Минздравом СС