Утверждены
Минздравом СССР
30 марта 1981 г. N 2351-81
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БАЦИТРАЦИНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
МЕТОДОМ БУМАЖНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Краткая характеристика препарата. Бацитрацин - антибиотик, получаемый микробиологическим синтезом. Применяется в животноводстве в качестве ростостимулирующего вещества. Выпускается в виде препарата бацилихина. Бацитрацин - бесцветный гигроскопический порошок горького вкуса. Растворим в метаноле, этиловом, изопропиловом, бутиловом спирте и воде. Нерастворим в ацетоне, хлороформе, бензоле. ПДК в воздухе рабочей зоны 0,01 мг/куб. м по бацитрацину.
Принцип метода. Определение основано на реакции взаимодействия бацитрацина с нингидриновым раствором. Нижний предел обнаружения 5 мкг в анализируемом объеме. Предел определения 0,1 - 5,0 мг/куб. м. Погрешность определения +/- 20%. Определению мешают другие аминосоединения.
Реактивы и растворы. Пропиловый спирт х.ч. Бензол х.ч. Ледяная уксусная кислота х.ч. Этиленгликоль х.ч. Бутиловый спирт х.ч. Раствор нингидрина 1-процентный в насыщенном водой бутиловом спирте (11,2 мл бутилового спирта + 100 мл воды). Стандартный раствор бацитрацина в этиловом спирте - 2,5 мг/мл: 62,5 мг стандарта бацитрацина помещают в колбу на 25 мл, доводят объем раствора до метки этиловым спиртом, хранят в холодильнике.
Приборы и посуда. Стаканы на 50 мл. Колбы мерные на 25 мл. Микропипетки. Камера для хроматографирования. Цилиндры мерные на 10 мл. Бумага фильтровальная "Ватман-1" или подобная. Фильтры АФА-ХП-18, АФА-ВП-10. Весы аналитические. Центрифуга. Электрокалорифер ЭК-4 или подобный. Электроаспиратор.
Отбор пробы воздуха. Воздух протягивают со скоростью 10 л/мин. через фильтр с помощью электроаспиратора. Для анализа необходимо отобрать 200 л воздуха.
Ход анализа. Фильтр с пробой помещают в стакан на 50 мл,
препарат смывают 2 - 3 раза минимальным количеством воды, в сумме
не более 10 мл, центрифугируют. Раствор упаривают досуха в токе
воздуха от электрокалорифера. Сухой остаток растворяют в 0,2 - 0,5
мл этанола и проводят хроматографирование. На полоску
хроматографической бумаги размером 16 x 10 см наносят от 5 до 30
мкл испытуемого раствора и раствора стандарта концентрацией 2,5
мг/мл. Каждый раз место, куда нанесена капля раствора, слегка
подсушивают в токе теплого воздуха. На дно хроматографической
камеры наливают систему растворителей, состоящую из 50 мл смеси
пропилового спирта с водой (3:1), 10 мл бензола, 2 мл ледяной
уксусной кислоты и 3 мл этиленгликоля. Через 40 - 60 мин. камера
насыщается парами растворителей и готова к работе. В камеру вносят
хроматографическую бумагу, которую крепят на стеклянной палочке.
Полоска должна погрузиться в жидкость на 1 см и не касаться стенок
камеры. Разгонка длится 4 ч. Затем полоску хроматографической
бумаги вынимают из камеры и подвешивают в вертикальном положении
на воздухе на 10 - 15 мин. Затем ее опрыскивают 1-процентным
раствором нингидрина и ставят в сушильный шкаф при 100 °C на 10
мин. для проявления. В результате нагревания в местах, где
присутствует антибиотик, появляются фиолетовые пятна с R 0,81
f
+/- 0,02.
Содержание бацитрацина определяют, сравнивая площадь и
интенсивность окраски пятна пробы и стандарта.
Концентрацию бацитрацина в воздухе (X, мг/куб. м) определяют
по формуле:
CS
x
X = ----,
S V
0 о
где:
C - количество бацитрацина в стандарте, мкг;
S - площадь пятна пробы, кв. мм;
x
S - площадь пятна стандарта, кв. мм;
0
V - объем пропущенного воздуха, приведенный к атмосферному
о
давлению 101,3 Па и температуре 20 °C, л.
Можно также использовать формулу:
A
X = -,
V
где:
A - содержание вещества в пробе, мкг;
V - объем воздуха, отобранный для анализа, л.
Требования безопасности. Соблюдаются меры безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами.