Указы СССР 1917-1992

Утверждены

Минздравом СССР

30 марта 1981 г. N 2351-81

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БАЦИТРАЦИНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

МЕТОДОМ БУМАЖНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Краткая характеристика препарата. Бацитрацин - антибиотик, получаемый микробиологическим синтезом. Применяется в животноводстве в качестве ростостимулирующего вещества. Выпускается в виде препарата бацилихина. Бацитрацин - бесцветный гигроскопический порошок горького вкуса. Растворим в метаноле, этиловом, изопропиловом, бутиловом спирте и воде. Нерастворим в ацетоне, хлороформе, бензоле. ПДК в воздухе рабочей зоны 0,01 мг/куб. м по бацитрацину.

Принцип метода. Определение основано на реакции взаимодействия бацитрацина с нингидриновым раствором. Нижний предел обнаружения 5 мкг в анализируемом объеме. Предел определения 0,1 - 5,0 мг/куб. м. Погрешность определения +/- 20%. Определению мешают другие аминосоединения.

Реактивы и растворы. Пропиловый спирт х.ч. Бензол х.ч. Ледяная уксусная кислота х.ч. Этиленгликоль х.ч. Бутиловый спирт х.ч. Раствор нингидрина 1-процентный в насыщенном водой бутиловом спирте (11,2 мл бутилового спирта + 100 мл воды). Стандартный раствор бацитрацина в этиловом спирте - 2,5 мг/мл: 62,5 мг стандарта бацитрацина помещают в колбу на 25 мл, доводят объем раствора до метки этиловым спиртом, хранят в холодильнике.

Приборы и посуда. Стаканы на 50 мл. Колбы мерные на 25 мл. Микропипетки. Камера для хроматографирования. Цилиндры мерные на 10 мл. Бумага фильтровальная "Ватман-1" или подобная. Фильтры АФА-ХП-18, АФА-ВП-10. Весы аналитические. Центрифуга. Электрокалорифер ЭК-4 или подобный. Электроаспиратор.

Отбор пробы воздуха. Воздух протягивают со скоростью 10 л/мин. через фильтр с помощью электроаспиратора. Для анализа необходимо отобрать 200 л воздуха.

    Ход  анализа.  Фильтр  с  пробой  помещают  в стакан на 50 мл,

препарат смывают  2 - 3 раза минимальным количеством воды, в сумме

не более 10  мл, центрифугируют.  Раствор  упаривают досуха в токе

воздуха от электрокалорифера. Сухой остаток растворяют в 0,2 - 0,5

мл   этанола   и   проводят   хроматографирование.    На   полоску

хроматографической бумаги размером 16 x 10  см  наносят от 5 до 30

мкл испытуемого раствора  и  раствора  стандарта концентрацией 2,5

мг/мл.  Каждый раз место,  куда  нанесена  капля  раствора, слегка

подсушивают  в  токе  теплого  воздуха.  На дно хроматографической

камеры  наливают  систему  растворителей, состоящую из 50 мл смеси

пропилового спирта с водой (3:1), 10  мл  бензола,  2  мл  ледяной

уксусной кислоты и 3 мл этиленгликоля. Через 40 - 60  мин.  камера

насыщается парами растворителей и готова к работе. В камеру вносят

хроматографическую  бумагу,  которую крепят на стеклянной палочке.

Полоска должна погрузиться в жидкость на 1 см и не касаться стенок

камеры.  Разгонка  длится  4  ч.  Затем полоску хроматографической

бумаги  вынимают  из камеры и подвешивают в вертикальном положении

на  воздухе  на  10 - 15  мин.  Затем  ее опрыскивают 1-процентным

раствором  нингидрина  и  ставят в сушильный шкаф при 100 °C на 10

мин.  для  проявления.  В  результате  нагревания  в  местах,  где

присутствует  антибиотик, появляются  фиолетовые  пятна с R   0,81

                                                           f

+/- 0,02.

    Содержание   бацитрацина   определяют,   сравнивая  площадь  и

интенсивность окраски пятна пробы и стандарта.

    Концентрацию  бацитрацина  в воздухе (X, мг/куб. м) определяют

по формуле:

                                 CS

                                   x

                             X = ----,

                                 S V

                                  0 о

    где:

    C - количество бацитрацина в стандарте, мкг;

    S  - площадь пятна пробы, кв. мм;

     x

    S  - площадь пятна стандарта, кв. мм;

     0

    V  - объем  пропущенного  воздуха,  приведенный к атмосферному

     о

давлению 101,3 Па и температуре 20 °C, л.

    Можно также использовать формулу:

                                  A

                              X = -,

                                  V

где:

A - содержание вещества в пробе, мкг;

V - объем воздуха, отобранный для анализа, л.

Требования безопасности. Соблюдаются меры безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами.