Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
4 октября 1988 г. N 4707-88
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АКРЕКСА И ДИНОСЕБА В КРОВИ И МОЧЕ
ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
1. Краткая характеристика препаратов
Акрекс (динобутон, талан, МС-1053, изофен)-2,4-динитро-6-втор-бутил-фенил-изопропилкарбонат
OCOOCH(CH )
____/ 3 2 C H O N .
// \\ 14 18 7 2
O N-// \\-CH(CH )C H
2 \ / 3 2 5 Мол. масса 326,31.
\____/
----\
NO
2
В чистом виде - кристаллическое вещество светло-желтого цвета. Т. пл. 61 - 62 °С. Препарат плохо растворим в воде, хорошо растворим в большинстве органических растворителей. Устойчив к кислотам, под действием щелочей гидролизуется с образованием диносеба.
Выпускается в виде 50-процентного смачивающегося порошка.
Применяется как контактный акарицид и фунгицид на цитрусовых культурах, огурцах и хлопчатнике.
Диносеб (гебутокс)-2,4-динитро-6-втор-бутилфенол
CH CH(CH )
_____/ 2 3 C H N O .
// \\ 10 12 2 5
O N-// \\-OH
2 \ / Мол. масса 240,2.
\_____/
-----\
NO
2
В чистом виде - желтое кристаллическое вещество. Т. пл. 38 - 42 °С. Растворитель в воде при 20 °C 50 мг/л, в этаноле 480 г/л, хорошо растворим и в других органических растворителях.
ЛД для крыс 40 - 50 мг/кг.
50
2. Методика определения
2.1. Принцип метода
Метод основан на подкислении анализируемой пробы минеральной кислотой, извлечении пестицидов диэтиловым эфиром и последующем определении тонкослойной хроматографией на пластинках "силуфол".
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
Предел обнаружения в пробе - 2,0 мкг
Размах варьирования - 72 - 85%
Стандартное отклонение - +/- 8,0%
Относительное стандартное отклонение - +/- 10,0%
2.3.1. Избирательность метода
Определению акрекса может мешать каратан, имеющий близкое значение R ,
1
однако совместно эти пестициды не применяются.
2.2. Реактивы и растворы
Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.
Диэтиловый эфир, х.ч., ГОСТ 6262-79.
Гексан, х.ч., ТУ 69-09-3375-78.
Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-79.
Этиловый спирт, ректификат, ГОСТ 5962-67.
Хлористоводородная кислота, ч., ГОСТ 3118-77; разбавленная дистиллированной водой в соотношении 1:1.
Муравьиная кислота, ч., ГОСТ 5848-73.
Сульфат натрия безводный, х.ч., ГОСТ 4266-77.
Гидроокись калия, ч.д.а., ГОСТ 9285-87.
Дистиллированная вода, ГОСТ 7602-72.
Пластины "силуфол", 15 x 15 см (ЧССР).
Универсальная индикаторная бумага.
Вата гигроскопическая.
Стандартные растворы акрекса и диносеба в ацетоне с концентрацией 100 мкг/мл. Растворы стабильны в течение 3 - 4 месяцев при хранении в холодильнике.
Проявляющий реактив: В мерную колбу на 100 мл помещают 5 г гидроокиси калия, растворяют в этиловом спирте и доводят до метки этиловым спиртом.
2.3. Приборы, аппаратура и посуда
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 23-11-917-76, или аналогичный прибор.
Водяная баня, ТУ 46-22-603-75.
Вакуумный водоструйный стеклянный насос, ГОСТ 25336-82.
Сушильный шкаф, ТУ 64-11-1411-76Е.
Делительные воронки, ГОСТ 25336-82, на 250 мл.
Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
Микропипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1; 0,2 мл.
Пипетки, ГОСТ 1770-74, на 1; 5 мл.
Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.
Колбы круглодонные, ГОСТ 25336-82, на 100 мл.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 50; 100 мл.
Воронки химические диаметр 6 см, ГОСТ 25336-82.
Ступка фарфоровая с пестиком, ГОСТ 9147-80.
Камера хроматографическая, ГОСТ 25336-82.
Пульверизатор стеклянный.
Палочки стеклянные.
2.4. Подготовка к определению
Хроматографическую камеру за 20 - 30 мин. до начала хроматографирования заполняют смесью растворителей гексан - диэтиловый эфир - муравьиная кислота (90:10:8) или гексан - бензол (2:3).
2.5. Проведение определения
Моча. 10 мл мочи помещают в делительную воронку на 250 мл, разбавляют до 50 мл дистиллированной водой, затем подкисляют до рН 1 - 2 разбавленной (1:1) хлористоводородной кислотой и трижды экстрагируют диэтиловым эфиром (20, 20 и 20 мл). В случае образования эмульсии к каждой порции экстракта прибавляют 5 - 7 мл этилового спирта.
Объединенный эфирный экстракт пропускают через безводный сульфат натрия (около 7 г) в круглодонную колбу и отгоняют эфир с помощью ротационного испарителя до объема около 2 - 3 мл. Остаток растворителя удаляют в токе воздуха до объема 0,2 - 0,3 мл.
Кровь. 2 мл крови помещают в фарфоровую ступку, прибавляют 0,5 мл разбавленной (1:1) хлористоводородной кислоты и растирают с 30 - 35 г безводного сульфата натрия до сыпучей массы (сульфат натрия прибавляют постепенно по 8 - 10 г).
Полученную массу помещают в коническую колбу на 100 мл, заливают 35 - 40 мл диэтилового эфира и экстрагируют пестициды в статических условиях, периодически перемешивая содержимое колбы, в течение 15 - 20 мин. Экстракт пропускают через безводный сульфат натрия в круглодонную колбу для отгонки растворителя. Экстракцию повторяют дважды свежими порциями эфира. Растворитель отгоняют с помощью ротационного испарителя до объема 2 - 3 мл. Остаток растворителя удаляют в токе воздуха до объема 0,2 - 0,3 мл.
Концентрат в колбе количественно с помощью микропипетки переносят на
пластинку. Параллельно на пластинку наносят серию стандартов с содержанием
2; 5; 10 мкг пестицидов в пятне (равные количества акрекса и диносеба
наносят в одну точку). Пластинку в течение 30 мин. выдерживают на воздухе и
помещают в хроматографическую камеру с одной из указанных выше систем
растворителей. После подъема фронта растворителя от стартовой линии на
высоту 10 см хроматографирование прекращают. Пластинку выдерживают в
вытяжном шкафу для удаления растворителя, орошают проявляющим реактивом и
помещают на 5 - 7 мин. в сушильный шкаф с температурой 100 - 105 °С. При
наличии пестицидов на хроматограмме проявляются окрашенные в ярко-желтый
цвет пятна. Величины R приведены в таблице.
1
Таблица
ВЕЛИЧИНЫ R АКРЕКСА И ДИНОСЕБА
1
┌────────────────────────┬────────────────────────────────────────────────┐
│ Пестицид │ Подвижный растворитель │
│ ├─────────────────────┬──────────────────────────┤
│ │гексан - бензол (2:3)│гексан - эфир - муравьиная│
│ │ │ кислота (90:10:2) │
├────────────────────────┼─────────────────────┼──────────────────────────┤
│Акрекс │ 0,25 │ 0,29 │
│Диносеб │ 0,53 │ 0,51 │
└────────────────────────┴─────────────────────┴──────────────────────────┘
2.6. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят сравнением площади и интенсивности окраски пятен пробы и стандартов.
Содержание пестицидов в анализируемой пробе Х (мг/мл) вычисляют по формуле:
А
X = -,
Р
где:
А - количество пестицида, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;
Р - объем анализируемой пробы, мл.
3. Требования безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с токсичными веществами, органическими растворителями, электронагревательными приборами.