Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
27 ноября 1984 г. N 3156-84
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БЛАЗЕРА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, СОЕ И ЗЕЛЕНЫХ
ЛИСТЬЯХ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
1.1. Химическое название - блазер (20%) селективный контактный гербицид.
Действующее вещество препарата - ацифлуорфен натрия - из группы дифенилэфиров. 5-[2-хлор-4(трифторметил)-фенокси]-2-нитробензоат натрия.
1.2. Структурная и эмпирическая формулы:
___ CO Na C H ClF NO Na
---Cl --- 2 14 6 3 5
F C-// \\-O-/ \-NO
3 \ ___ / \\ // 2 Мол. масса 383,65.
--- ---
1.3. Совместимость.
С другими гербицидами смешивать не рекомендуется. Дальнейшая борьба с сорняками может проводиться лишь через 7 дней после опрыскивания блазером.
1.4. Химически чистое соединение - белое кристаллическое вещество со слабым запахом. Точка плавления - 250 °С (с разложением).
Хорошо растворяется в воде (> 25%), этаноле, метаноле, ацетоне (больше 5 х 10 мг/л); практически не растворим в гидрофобных органических растворителях.
Выпускаются две препаративные формы (к.э.): блазер 2 L и блазер 2 S,
содержащие почти равное количество (20,4 и 21,4%) действующего вещества.
ЛД для крыс - 1300 мг/кг; для пчел ЛД - 271,26 мг/пчела.
50 50
1.5. Биологические свойства
Блазер - новый высокоэффективный селективный контактный послевсходовый гербицид, подавляющий широколистные сорняки, произрастающие на полях сои. Имеет широкий спектр действия и может использоваться в любой стадии развития сои. При проникновении блазера через листовую поверхность сорняки начинают погибать через 3 - 4 часа. Используется в дозе 2 л/га. ДОК не установлен.
2. Методика определения блазера
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода.
Методика основана на извлечении блазера из воды, почвы и растительных проб одним из растворителей с последующим хроматографированием в тонком слое стандартных пластинок "Силуфол".
2.1.2. Метрологическая характеристика метода.
┌────────┬──────────┬─────────────┬───────────┬───────────┬───────┬───────┐
│Объект │Среднее │Доверительный│Стандартное│Относитель-│Предел │Нижний │
│исследо-│значение │ интервал │отклонение,│ное стан- │обнару-│предел │
│вания │определе- │среднего при │ S (%) │дартное │жения, │обнару-│
│ │ _ │альфа - 0,95;│ │отклонение,│мг/кг; │жения, │
│ │ния, с (%)│ n - 6 (%) │ │S (%) │мг/л │мкг │
│ │ │ │ │ r │ │ │
├────────┼──────────┼─────────────┼───────────┼───────────┼───────┼───────┤
│Почва │84,5 │84,5 +/- 5 │3,62 │4,3 │0,10 │0,5 - 1│
│Вода │91,8 │91,8 +/- 3 │2,32 │2,5 │0,05 │ │
│Соя │80,0 │80,0 +/- 5 │3,75 │4,7 │0,10 │ │
│Зеленые │79,0 │79,0 +/- 7 │5,90 │7,5 │0,20 │ │
│листья │ │ │ │ │ │ │
└────────┴──────────┴─────────────┴───────────┴───────────┴───────┴───────┘
2.1.3. Избирательность метода
Метод специфичен, другие соединения типа мочевинопроизводных, симм-триазиновых в данных условиях хроматографирования определению не мешают.
2.2. Реактивы и растворы
Алюминия окись безводная, ТУ 6-09-426-83.
Аммония хлорид, х.ч., ГОСТ 3773-60.
Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79; осч., ТУ-6-09-3513-82.
Вода дистиллированная.
н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.
1
Индиго - 5,5 - дисульфокислоты динатриевая соль (индиго-дисульфонат
натрия), ч.д.а., ТУ 711-31-70.
Натрия сульфат безводный, ч., ГОСТ 4166-76.
Серебро азотнокислое, х.ч., ГОСТ 1277-81.
Серная кислота, х.ч., ГОСТ 4204-77.
Стандартный раствор блазера в этаноле (200 мкг/мл. Хранить в холодильнике, срок годности 3 месяца).
Фосфорная кислота (орто), х.ч., ГОСТ 6552-80.
Этиловый спирт 96-процентный, ТУ 6-09-1710-77.
Этилацетат, х.ч., ТУ 6-09-6515-70.
Натр едкий, ч.д.а., ГОСТ 4328-77.
Проявляющие реактивы:
1) 0,1-процентный раствор индигокармина (0,1 г индигокармина растирают в ступке с 5-ю мл концентрированной серной кислоты, оставляют на ночь, после чего доводят дистиллированной водой до 100 мл);
Примечание: проявление хроматограмм можно производить как первым, так и
вторым способом. Для более четкой вырисовки пятен после AgNO и
3
УФ-облучения можно опрыснуть индигокармином. В первом случае препарат
проявляется в виде белых пятен на бежеватом фоне, во втором - синих пятен
на бледно-голубом фоне.
2) 1-процентный раствор азотнокислого серебра в этаноле;
3) Ультрафиолетовое облучение.
2.3. Приборы и посуда
Аппарат для встряхивания проб, АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.
Вентилятор.
Весы равноплечие ручные (ВР-1, ВР-20, ВР-100), ГОСТ 359-54.
Весы аналитические АДВ-20.
Воронки химические, ГОСТ 8613-75.
Воронки делительные, ГОСТ 8613-75.
Воронки Бюхнера, ГОСТ 9147-81.
Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-75.
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.
Колбы плоскодонные емкостью 150 - 250 мл, ГОСТ 1770-74.
Колбы мерные на 50 - 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Колбы Бунзена, ГОСТ 6514-75.
Лампа ртутно-кварцевая ПРК-2 или ПРК-4 (для УФ-облучения).
Мензурки на 25 - 50 мл.
Мельница.
Микропипетки для нанесения растворов на 0,1 - 0,2 мл, ГОСТ 20292-74.
Палочки стеклянные.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.
Сито с отверстиями 0,1 мм и 1 мм.
Фильтры бумажные, ТУ 6-09-1678-77.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1. Отбор, хранение и доставка проб.
Отбор, хранение и доставку проб производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения пестицидов", утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР А.И. Заиченко за N 2051-79 от 21 августа 1979 г.
2.5. Проведение определения
2.5.1. Экстракция препарата из анализируемой пробы.
Вода. 1) 100 мл анализируемой воды сразу помещают в колбу для ротационного испарителя и выпаривают досуха. Препарат извлекают небольшими порциями (0,1 - 0,3 мл) этилацетата и наносят на хроматографическую пластинку.
2) К 100 мл анализируемой воды прибавляют 50 мл этилацетата и ставят на аппарат для встряхивания на 20 - 30 минут. Этилацетат сливают, прибавляют его новую порцию (25 мл) к воде и снова встряхивают на качалке. Эту операцию повторяют еще раз и через делительную воронку отделяют этилацетатные экстракты. Последние проводят через безводный сернокислый натрий, переносят в колбу для отгонки растворителя, упаривают и хроматографируют.
Примечание: При работе вторым способом иногда при сильном встряхивании образуются стойкие эмульсии, которые можно устранить добавкой небольшого количества (до 1 мл) этилового спирта.
Почва. 100 г воздушно-сухой почвы, предварительно просеянной через сито, заливают водой (до покрытия пробы) и оставляют на ночь или ставят на аппарат для встряхивания на два часа. Воду отфильтровывают через бюхнеровскую воронку. Полученную водную вытяжку выпаривают досуха, а препарат извлекают небольшими порциями (по 0,3 мл) этилацетата и наносят на хроматографическую пластинку.
Соя. 1) К 5 г сои (грубый помол с частицами в 1 - 2 мм) добавляют оводненный ацетон (60%), оставляют на ночь или ставят на качалку на 30 минут. Отфильтровывают через бюхнеровскую воронку и ставят на выпаривание до маслянистого остатка. Остаток обмывают 10 - 15 мл 1% раствора NaOH. Эту манипуляцию проделывают еще 2 раза. Полученный щелочной раствор помещают в делительную воронку и дважды энергично встряхивают с гексаном. Гексан как ненужную фракцию отбрасывают, а раствор щелочи подкисляют соляной кислотой до нейтральной реакции. Из последнего препарата извлекают этилацетатом (20 мл) трижды. Этилацетатные экстракты объединяют, проводят через безводный сернокислый натрий и выпаривают досуха, затем наносят на пластинку.
2) К 5 г сои добавляют воду и равное количество коагулирующей смеси: 5 г хлорида аммония растворяют в 10 мл дистиллированной воды, приливают 10 мл 85% ортофосфорной кислоты и доводят дистиллированной водой до 1 литра, и ставят на качалку на 30 минут. Затеи отфильтровывают, доводят раствор до нейтральной реакции 10% раствором NaOH и извлекают этилацетатом по 25 мл трижды. Этилацетатные экстракты объединяют, высушивают безводным сернокислым натрием и выпаривают на роторном испарителе до 0,1 мл. Препарат извлекают небольшими порциями этилацетата и наносят на пластинку.
Зеленые листья. Растертые листья (10 г) заливают водой и оставляют на ночь или ставят на аппарат для встряхивания на 2 часа, затем извлекают этилацетатом (по 25 мл) трижды. Объединенные экстракты высушивают безводным сернокислым натрием, выпаривают на роторном испарителе и наносят на пластинку.
2.5.2. Хроматография в тонком слое сорбента.
Пробу количественно переносят на хроматографическую пластинку "Силуфол". Рядом наносят стандартный раствор с различным содержанием блазера (10 - 20 мкг). После этого пластинку помещают в камеру для хроматографирования, предварительно наполненную растворителем. Перед каждой хроматограммой растворитель следует менять на свежеприготовленный. Подвижной фазой для блазера является смесь гексана с ацетоном в соотношении 59:41 или изопропиловый спирт с бензолом - 25:75. После поднятия линии фронта на 12 - 13 см пластинку из камеры вынимают, высушивают на воздухе до полного удаления растворителя.
Проявление зон локализации блазера на хроматограмме производят одним из указанных проявителей.
Блазер на пластинках "Силуфол"проявляется в виде двух пятен:
R верхнего пятна - 0,45; нижнее - чуть отделяется от пятна.
f
Примечание. В случае проб сои иногда можно использовать многоступенчатую (3 - 4 раза) вытеснительную хроматографию (хроматограмму опускать в ту же подвижную фазу после просушивания и удлинения фронта разгонки), чтобы отгонять ближе к фронту нежелательные компоненты.
2.6. Обработка результатов
Содержание блазера в исследуемой пробе вычисляют по формуле:
А
Х = -,
Р
где:
А - количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;
Р - навеска пробы, г или мл;
Х - содержание блазера в пробе, мг/кг или мг/л.
3. Техника безопасности
Необходимо соблюдать все общепринятые правила по технике безопасности, обычно рекомендуемые при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.
4. Методика разработана
Ст.н.с, к.б.н. Н.В. Бажановой, мл.н.с., к.б.н. М.Г. Алтунян и мл.н.с. Ж.А. Арутюнян (Научно-исследовательский институт защиты растений, гор. Ереван).
5. Методика апробирована
а) В санитарно-гигиенической лаборатории при Республиканской санитарно-эпидемиологической станции МЗ Арм. ССР.
б) В контрольно-токсикологической лаборатории Республиканской станции защиты растений ПНО "Армсельхозхимия".