Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
27 ноября 1984 г. N 3164-84
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТОПСИНА-М В ЯБЛОКАХ, ПЕРСИКАХ,
ФЕЙХОА И ХУРМЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
(Дополнение к N 1760-77)
1. Краткая характеристика препарата
Топсин-М, топсин ИФ-44.
Действующее вещество - метилтиофанат - 1,2-бис(3-карбометоксилурендо)бензол.
S O
││ ││
/ \\-NH-C -NH-C -OCH
││ │ 3 Мол. масса 342,4.
\ //-NH-C -NH-C -OCH
││ ││ 2 C H O N S .
S O 12 14 4 4 2
Чистый фунгицид - белый порошок с температурой плавления 177 - 178 °C,
плавится с разложением. Хорошо растворим в хлороформе, этилацетате,
ацетоне, низкомолекулярных спиртах, мало растворим в воде.
Медленно гидролизуется в щелочной среде. При метаболизме и гидролизе
образуется системный фунгицид ВМК. Топсин-М выпускается в форме
70-процентного с.п. ЛД для крыс - 6600 мг/кг.
50
МДУ в персиках - 1,0 мг/кг; яблоках - 0,5 мг/кг, в фейхоа и хурме содержание метилтиофаната не нормировано.
2. Методика определения метилтиофаната
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на определении фунгицида методом ТСХ после извлечения из растительной пробы хлороформом и очистки экстракта путем перераспределения в системе водный этанол - хлороформ.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
┌─────────────────────┬───────────────────────────────────────────────────┐
│ Метрологические │ Анализируемый объект │
│ параметры ├────────────┬────────────┬────────────┬────────────┤
│ │ яблоки │ персики │ фейхоа │ хурма │
├─────────────────────┼────────────┼────────────┼────────────┼────────────┤
│1. Предел │0,08 │0,08 │0,06 │0,07 │
│обнаружения, мг/кг │ │ │ │ │
│2. Число параллельных│6 │6 │6 │6 │
│определений │ │ │ │ │
│3. Среднее значение │78,2 │80,2 │85,5 │83,8 │
│определения, % │ │ │ │ │
│4. Стандартное │8,9 │8,2 │7,9 │8,0 │
│отклонение, % │ │ │ │ │
│5. Доверительный │78,2 +/- 9,3│80,2 +/- 8,6│85,5 +/- 8,3│89,8 +/- 8,4│
│интервал среднего │ │ │ │ │
│при альфа = 0,95% │ │ │ │ │
└─────────────────────┴────────────┴────────────┴────────────┴────────────┘
2.1.3. Избирательность метода
Метод специфичен. Определению метилтиофаната не мешают другие фунгициды, применяемые в сельском хозяйстве для защиты субтропических плодовых культур.
2.2. Реактивы и материалы
Хлороформ, ГОСТ 2603-71, хч.
Гексан ч, ТУ 6-09-3375-78.
Этилацетат ч, ГОСТ 22300-76.
Ацетон осч, ТУ 6-09-3513-82.
Натрий сернокислый безводный чда, ГОСТ 4166-76.
Серебро азотнокислое чда, ГОСТ 1277-75.
Бромфеноловый синий чда, ТУ 6-09-13-70.
Спирт этиловый, ТУ 6-09-17-10-77, 96%.
Кислота уксусная ледяная хч, ГОСТ 61-75.
Бумага фильтровальная, ТУ 6-09-1678-77.
Пластинки "Силуфол - UV " или "Силуфол".
254
Вата обезжиренная гигроскопическая.
Вода дистиллированная.
Проявляющий реактив: 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 22,5 мл дистиллированной воды, доводят до 100 мл ацетоном и добавляют в раствор 0,05 г бромфенолового синего.
Стандартный раствор метилтиофаната в хлороформе (100 мкг/мл).
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Испаритель ротационный ИР-1, ТУ 25-11-917-74.
Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-75.
Камера для опрыскивания хроматографических пластинок.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.
Воронки делительные емкостью 150 мл, ГОСТ 8613-72.
Колбы лабораторные конические емкостью 250 мл, ГОСТ 10394-72.
Колбы круглодонные для отгонки растворителей емкостью 100 и 250 мл, ГОСТ 10394-72.
Воронки химические емкостью 150 мл, ГОСТ 8613-75.
Пипетки емкостью 0,1, 1, 5 мл, ГОСТ 20292-74.
Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-2451-72.
Мерные цилиндры емкостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Шприц медицинский стеклянный емкостью 1 мл.
Хроматоскоп.
2.4. Отбор проб
Пробы для анализа отбираются в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Зам. Главного государственного санитарного врача СССР за N 2051-79, 21.08.1979.
2.5. Проведение определения
2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов
Навеску пробы 25 г тщательно измельчают, заливают 50 мл хлороформа и экстрагируют в течение 30 минут на аппарате для встряхивания. Экстракт фильтруют через обезжиренную вату в колбу перегонного аппарата емкостью 250 мл, в остаток добавляют 25 мл хлороформа и встряхивают еще раз в течение 15 минут. Экстракты объединяют и отгоняют на ротационном испарителе при температуре 40 °C досуха. Остаток тщательно растворяют в 0,40 - 0,45 мл хлороформа, затем в колбу вносят 5 мл охлажденного 60-процентного этилового спирта и перемешивают содержимое. Пробу фильтруют через смоченный водой фильтр в делительную воронку, а остаток в колбе последовательно промывают 3 мл 60-процентного этилового спирта, 10 мл дистиллированной воды и переносят через фильтр в ту же делительную воронку. В пробу добавляют 12 мл воды, 30 мл хлороформа и интенсивно встряхивают в течение 3 минут. После разделения фаз (10 минут) хлороформенный экстракт сушат безводным сульфатом натрия, переносят его в колбу перегонного аппарата емкостью 100 мл и отгоняют на ротационном испарителе при температуре 40 °C до 1 мл.
2.5.2. Хроматографирование
1/5 часть пробы наносят медицинским стеклянным шприцем на
хроматографическую пластинку "Силуфол" или "Силуфол - UV ". Слева и
254
справа наносят стандартные растворы метилтиофаната и хроматографируют в
системе растворителей н-гексан - этилацетат - ацетон в объемном соотношении
7:4:4, R метилтиофаната - 0,70 +/- 0,03. Можно использовать систему
f
хлороформ - этилацетат - ледяная уксусная кислота в объемном соотношении
50:50:10, R метилтиофаната - 0,85 +/- 0,03, R БМК - 0,38 +/- 0,02.
f f
После высушивания пластинок на воздухе обнаружение метилтиофаната
проводят проявляющим реактивом и через минуту обесцвечивают фон пластинки 5
мл уксусной кислоты. Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,3
- 5,0 мкг. Метилтиофанат проявляется в виде сиреневых, БМК - в виде синих
пятен. Обнаружение метилтиофаната можно проводить в УФ-свете при
использовании пластинок "Силуфол - UV ". Зоны локализации пестицидов
254
проявляются в виде сиреневых пятен. Нижний предел обнаружений
метилтиофаната составляет 1,0 мкг.
2.6. Обработка результатов анализа
Количественное определение метилтиофаната проводят сравнением размеров площадей и интенсивности окраски пятен исследуемого вещества в пробе и стандартного раствора. Содержание анализируемого соединения в плодах вычисляют по формуле:
A x P x 100
2
X = ------------ мг/кг,
P x M x D
1
где:
A - количество метилтиофаната в стандартном растворе, мкг;
P - площадь пятна стандартного раствора, кв. мм;
1
P - площадь пятна пробы, кв. мм;
2
M - масса исследуемой пробы, г;
D - процент определения.
2.7. Требования безопасности
Соблюдаются общие правила по технике безопасности, необходимые при работе с химическими реактивами и пестицидами (ядохимикатами).