Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6255-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИАФЕНТИУРОНА (ПЕГАСА) В ВОДЕ, ПОЧВЕ,
ЦИТРУСОВЫХ, СЕМЕНАХ ХЛОПЧАТНИКА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. Краткая характеристика препарата
Диафентиурон (пегас CGA 106630) - препарат производства фирмы "СибаГейги", кристаллическое вещество белого цвета, хорошо растворим в ацетонитриле.
H C CH
3 3
\/
C-H
/
/\\ O /\\ / H C CH
/ \\/ \/ \\/ S 3 3
││ │ ││ │ \\ \ / М.м. 384,59.
\ // \ //\ C C
\// \// \ / \ / \
│ N N CH
H C-CH │ │ 3
3 │ H H
CH
3
Рекомендован как несистемный инсектоакарицид. Легко разрушается под действием солнечного света. Рекомендуется хранить в закрытой таре при температуре не выше 5 °C.
2. Определение диафентиурона в воде, почве, цитрусовых,
семенах хлопчатника методами газовой и тонкослойной
хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на определении диафентиурона газожидкостной и тонкослойной хроматографией после извлечения из анализируемой пробы органическим растворителем. Тонкослойная хроматография проводится в тонком слое силикагеля. Газохроматографическое определение проводится на макрокапиллярной колонке либо на набивной колонке в виде гептафторпроизводного.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
Диапазон определяемых концентраций - 0,01 мг/л для воды; 0,03 мг/кг - для почвы, растений.
┌─────────────┬─────────────┬────────────┬─────────────┬────────────────────┐
│Анализируемый│ Размах │ Среднее │Относительное│ Доверительный │
│ объект │варьирования,│ значение │ стандартное │интервал среднего, %│
│ │ % │определения,│ откл., % │ n = 5, P = 0,95 │
│ │ │ % │ │ │
├─────────────┼─────────────┼────────────┼─────────────┼────────────────────┤
│Вода │85,7 - 90,5 │87,5 │+/- 4,2 │+/- 4,6 │
│Почва │80,1 - 85,3 │82,6 │+/- 5,7 │+/- 7,9 │
│Лимоны │77,1 - 86,0 │84,3 │+/- 5,8 │+/- 7,8 │
│Семена │75,0 - 85,0 │80,7 │+/- 5,9 │+/- 8,0 │
│хлопчатника │ │ │ │ │
└─────────────┴─────────────┴────────────┴─────────────┴────────────────────┘
2.2. Реактивы и растворы
Ацетон, хч, ГОСТ 2603-79.
н-Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78.
Сульфат натрия безводный, ГОСТ 4166-76.
Хлороформ, ч, ГОСТ 20015-74.
Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-3534-87.
Оксид алюминия II ст. акт., ч, МРТУ 6-09-5296-68.
Приготовление стандартных растворов диафентиурона
Стандартный раствор, содержащий 1000 мкг/мл вещества, готовят растворением 50 г препарата в мерной колбе на 50 мл в ацетонитриле (ацетоне). Исходный основной раствор можно хранить в холодильнике в течение 2-х недель.
Рабочие стандартные растворы готовят разбавлением исходного основного раствора. Рабочие растворы хранят не более 2-х суток (препарат разлагается на свету).
Получение фторпроизводного диафентиурона с концентрацией 1 мкг/мл: 10 мкл основного стандартного раствора, содержащего 10 мкг вещества, переносят в мерную пробирку, прибавляют 10 мкл гептафтормасляного ангидрида и оставляют на 1 час. По истечении этого времени избыток реагентов отдувают в токе сжатого воздуха. Сухой остаток разбавляют в 10 мл гексана.
К методу ГЖХ
Гептафтормасляный ангидрид, ч, ТУ 6-09-40-2571-87.
Азот газообразный, ГОСТ 9293-74.
Хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30.
К методу ТСХ
Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-4530-77.
Нитрат серебра, ГОСТ 1277-81.
Лимонная кислота, ГОСТ 908-79, 2-процентный раствор.
Пластинки "Силуфол"(Хемапол, ЧССР).
Проявляющий реактив: Раствор А: 100 мг бромфенолового синего
растворяют в 10 мл ацетона.
Раствор Б: 1 г нитрата серебра
растворяют в 40 мл воды и
прибавляют 120 мл ацетона.
Растворы А и Б сливают в мерную колбу на 200 мл и доводят ацетоном до метки.
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Хроматограф "Цвет-106" с ТИД и ДПР.
Стеклянная макрокапиллярная колонка с фазой SE-301 с толщиной пленки 2 мкм, диаметром 0,6 мм, длиной 55 м.
Колонка стеклянная 1000 x 3 мм с 5% SE-30.
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-21-1087-73.
Микрошприц МШ-10, ТУ 2.833.106.
Посуда лабораторная по ГОСТ 1770-74, 25336-82, 20292-74.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82.
2.4. Отбор, хранение и доставка проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 за N 2051-79.
2.5. Проведение определения
2.5.1. Экстракция
Вода. 500 мл пробы помещают в делительную воронку и препарат экстрагируют трижды по 30 мл хлороформа. Отделяют органический слой, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют до объема 0,3 - 0,5 мл при температуре бани не выше 60 °C. Досуха удаляют остаток растворителя на воздухе. Далее проводят определение методами ГЖХ и ТСХ.
Почва, лимоны, семена хлопчатника. 10 г анализируемой пробы (лимоны и семена хлопчатника измельчают на электромельнице, почву просушивают и просеивают) помещают в колбу емкостью 500 мл и заливают 150 мл хлороформа. Встряхивают в течение 1,5 - 2 часов. Экстракцию повторяют трижды. Объединенный экстракт сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют на ротационном испарителе до 1 - 2 мл при температуре не выше 60 °C.
2.5.2. Очистка экстракта
Упаренный экстракт (1 - 2 мл) вносят в стеклянную колонку, заполненную 10 г оксида алюминия и 2 - 3 г безводного сульфата натрия, уплотненных и промытых ацетонитрилом. Элюируют пробу 200 мл ацетонитрила. Элюат концентрируют до объема 0,2 - 0,5 мл. Остаток в колбе растворяют в 50 мл гексана и переносят в делительную воронку. Прибавляют в делительную воронку 15 мл ацетонитрила, встряхивают, дают разделиться фазам. Отделяют ацетонитрил, а к гексану добавляют новые 15 мл ацетонитрила. Экстракцию повторяют трижды. Объединяют ацетонитрильную фракцию, концентрируют до объема ~ 0,1 мл. Полностью удаляют растворитель на воздухе. Далее проводят определение методами ГЖХ и ТСХ.
2.5.3. Определение методом ГЖХ
А. Условия хроматографирования при определении на макрокапиллярной колонке
Хроматограф "Цвет-106" с термоионным детектором.
Колонка макрокапиллярная с фазой SE-301, толщина пленки 2 мкм, диаметр 0,6 мм, длина 55 м.
Температура испарителя - 230 °C.
Температура колонки - 230 °C.
Расход газа-носителя - 30 мл/мин.
Время удерживания - 3,7 мин.
Минимально детектируемое количество - 20 нг.
Б. Условия хроматографирования при определении в виде фторпроизводного
Пробу после концентрирования переносят количественно 1 - 2 мл ацетонитрила в пробирку на шлифе. Удаляют растворитель с помощью сжатого воздуха полностью. К сухому остатку приливают 0,1 мл ацетонитрила и 10 мкл гептафтормасляного ангидрида, оставляют на 1 час на воздухе. Затем удаляют избыток реагента струей воздуха полностью. К сухому остатку приливают 1 мл гексана и аликвоту 3 - 5 мкл вводят в хроматограф.
Условия хроматографирования
Газовый хроматограф "Цвет-106"с детектором постоянной скорости рекомбинации.
Носитель - хроматон N-AW (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30.
Колонка стеклянная 1000 x 3 мм.
Скорость газа-носителя - 50 мл/мин.
-12
Шкала электрометра - 20 x 10 А.
Температура колонки - 170 °C.
Температура испарителя - 240 °C.
Температура детектора - 240 °C.
Вводимый объем - 5 мкл.
Линейный диапазон детектирования - 2 - 10 нг.
Время удерживания - 4 мин.
2.6. Обработка результатов
Содержание диафентиурона в пробе вычисляют по формуле:
G x h x V
ст пр общ
X = ----------------,
h x V x P
ст 1
где:
X - содержание препарата в пробе, мг/кг, мг/л;
G - количество стандартного раствора, введенного в
ст
хроматограф, нг;
h - высота пика стандартного раствора, мм;
ст
h - высота пика пегаса в исследуемой пробе, мм;
пр
V - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;
1
V - общий объем пробы, мл;
общ
P - навеска пробы, г (мл).
2.7. Определение методом ТСХ
Пробу, сконцентрированную до объема 0,1 - 0,2 мл,
количественно наносят на пластинку "Силуфол" (пластинка
предварительно промыта в ацетоне), смывая остаток 2 - 3 раза
хлороформом. Центр пятна должен быть на расстоянии 2 см от нижнего
края пластинки. Справа и слева от пробы наносят стандартные
растворы пестицида, содержащие 2, 5, 10 мкг препарата. Пластинку с
нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, в
которую налита смесь гексан:хлороформ (1:2). После поднятия фронта
растворителей на 10 см пластинку вынимают и оставляют на несколько
мин. на воздухе для испарения подвижного растворителя. После этого
пластинку обрабатывают из пульверизатора раствором бромфенолового
синего, затем обесцвечивают 2-процентным раствором лимонной
кислоты. Диафентиурон проявляется в виде пятен сине-бурого цвета
на желтом фоне с R 0,5 +/- 0,05.
f
Количество препарата в пробе определяют сравнением интенсивности окраски и площади пятен пробы и стандартного раствора.
Количество препарата в пробе определяют по формуле:
A
X = -,
P
где:
X - содержание пегаса в пробе, мг/кг, мг/л;
A - количество пегаса, найденное в пробе, мкг;
P - навеска пробы, г (мл).
2.8. Техника безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.