Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
27 апреля 1984 г. N 3012-84
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ РОНСТАРА В ПОЧВЕ,
РАСТЕНИЯХ И ЭФИРНЫХ МАСЛАХ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
1. Краткая характеристика препарата
1.1. Ронстар - гербицид для борьбы с сорняками в посадках риса, лаванды, шалфея, герани, мяты. Действующее начало препарата - 2-трет-бутил-4/5-изопропокси-2,4-дихлорфенил/1,3,4-оксадиазолин-5.
O
O / \ C(CH ) C H Cl N O .
(CH ) -CHO \\/ \/ 3 2 15 18 2 2 3
3 2 \_____ │ │
// \\__N└───┘N Мол. масса 345,2.
Cl-\_____/
-----\
Cl
1.2. Название ИСО - оксадиазон.
1.3. В чистом виде - белое кристаллическое вещество, температура
плавления 90 °C. Растворимость в воде 0,7 мг/л, хорошо растворим в этаноле,
-6
ацетоне, хлороформе, бензоле. Давление насыщенного пара 10 мм рт. ст.
Выпускается в виде смачивающегося порошка и гранул. ЛД для крыс 8000
50
мг/кг.
2. Методика определения ронстара в почве, растениях
и эфирных маслах газожидкостной хроматографией
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении ронстара из почвы и растений ацетоном, очистке экстрактов перераспределением в системе двух несмешивающихся жидкостей, дополнительной очистке растительных экстрактов на колонке с окисью алюминия и газохроматографическом определении с помощью детекторов: с постоянной скоростью рекомбинации и термоионного. Из эфирных масел ронстар извлекают диметилсульфоксидом, промывают н-гексаном и определяют методом газожидкостной хроматографии с термоионным детектором.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
Минимально детектируемое количество ронстара:
- с детектором постоянной скорости рекомбинации - 0,1 н;
- с термоионным детектором - 0,5 нг.
Нижний предел определения, мг/кг:
- почва: с ДПР - 0,002, с ТИД - 0,01;
- эфиромасличные растения: с ДПР - 0,004, с ТИД - 0,02;
- эфирные масла - 0,1.
_
Среднее значение процента определения C при n = 5, %:
- почва - 88,3;
- эфиромасличные растения - 70,7;
- эфирные масла - 73,9.
Стандартное отклонение S , %:
x
- почва - 18,6;
- эфиромасличные растения - 13,1;
- эфирные масла - 19,4.
Относительное стандартное отклонение S_, %:
x
- почва - 8,3;
- эфиромасличные растения - 5,9;
- эфирные масла - 8,7.
Доверительный интервал среднего при P = 0,95 и n = 5, %:
- почва - 23,1;
- эфиромасличные растения - 16,3;
- эфирные масла - 24,2.
Размах варьирования R:
- почва - 77,4 - 96,8;
- эфиромасличные растения - 62,4 - 82,7;
- эфирные масла - 62,1 - 84,4.
2.1.3. Избирательность метода
Метод не селективен в присутствии гербицидов нитрохлора и дактала при использовании для хроматографического определения ронстара детектора постоянной скорости рекомбинации, поэтому в качестве дополнительного способа идентификации необходимо использовать газожидкостную хроматографию с термоионным детектором.
2.2. Реактивы и растворы
Диметилсульфоксид, МРТУ 6-09-5097-68, хч.
Ацетон, ГОСТ 2603-79, осч.
н-Гексан, ТУ 6-09-3375-78, ч, свежеперегнанный.
Ацетонитрил, МРТУ 6-09-3534-74, ч.
Окись алюминия для хроматографирования, МРТУ 6-09-5296-68, ч, II ст. активности.
Сульфат натрия безводный, ГОСТ 4166-76, хч.
Диэтиловый эфир (для наркоза), фармакопея СССР.
Хроматон N-AW-DMCS (0,20 - 0,25 мм) с 5% XE-60, ЧССР.
Хроматон N-AW-DMCS (0,20 - 0,25 мм) с 5% SE-30, ЧССР.
Стандартные растворы ронстара в ацетоне с содержанием 100, 10 мкг/мл. Для приготовления стандартного раствора берут на аналитических весах навеску ронстара 10 мг +/- 0,0002 г, помещают ее в мерную колбу емкостью 100 мл. Навеску растворяют в 10 - 15 мл ацетона и доводят до метки тем же растворителем. Раствор содержит 100 мкг/мл ронстара. Из раствора пипеткой переносят в мерную колбу на 100 мл 10 мл раствора и доводят до метки ацетоном. Раствор содержит 10 мкг/мл ронстара, растворы стабильны при хранении в холодильнике в течение 6 месяцев.
2.3. Приборы и посуда
Хроматограф "Цвет-106" с детектором термоионным, ТУ 1.550.003.
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73.
Ротационный вакуумный испаритель, RV 0-64, ЧССР.
Делительные воронки на 250 мл, 500 мл, ГОСТ 10054-75.
Колбы плоскодонные, конические на 250 мл, ГОСТ 10394-72.
Колбы круглодонные на 100 мл, ГОСТ 10394-72.
Мерные цилиндры на 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Микрошприцы на 1 мкл (МШ-1) и 10 мкл (МШ-10).
Пипетки на 1 и 10 мл, ГОСТ 1770-74.
Мерные колбы на 100 мл, ГОСТ 1770-74.
Колонки для хроматографирования 100 x 15 мм.
2.4. Подготовка к определению
Органические растворители (ацетон, н-гексан) перед началом работы необходимо перегнать, сульфат натрия прокалить при температуре 300 - 400 °C. Хроматографическую колонку и детектор кондиционируют в режимных условиях в течение 2-х часов.
Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР N 2051-79 от 21.08.79. Для анализа отбирают среднюю пробу почвы - 100 г, растений эфиромасличных культур - 50 г, эфирного масла - 10 г.
2.5. Проведение определения
2.5.1. Почва
100 г измельченной и просеянной через сито почвы помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, заливают 150 мл ацетона и встряхивают 1 час с помощью механического встряхивателя, оставляют на ночь. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр в плоскодонную колбу на 250 мл. Остаток на фильтре промывают ацетоном 2 x 30 мл. Фильтрат упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани 50 °C до 10 мл. Остаток количественно с 30 мл н-гексана переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, прибавляют 200 мл дистиллированной воды и реэкстрагируют ронстар н-гексаном, 3 x 30. Объединенный гексановый экстракт сушат, пропуская через 35 г безводного сульфата натрия, и концентрируют на ротационном испарителе досуха. К сухому остатку по стенкам колбы прибавляют 1 мл ацетона, закрывают и вращают колбу. В испаритель хроматографа вводят 2 мкл раствора. Хроматографируют с ТИД и ДПР.
2.5.2. Эфиромасличные растения
50 г свежесрезанных растений гомогенизируют со 150 мл ацетона в течение
15 - 20 мин. со скоростью 8000 об./мин., встряхивают 30 - 40 мин. Экстракты
фильтруют через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Стакан
гомогенизатора промывают 3 x 20 мл ацетоном и через фильтр присоединяют
смыв к основному фильтрату. Упаривают ацетон на ротационном испарителе до
10 мл при температуре бани 50 °C. Остаток количественно с 50 мл
ацетонитрила переносят в делительную воронку емкостью 250 мл с 50 мл
н-гексана. Встряхивают 1 - 2 мин. и отделяют верхний слой. Операцию
проводят еще дважды. Нижний слой переносят на делительную воронку емкостью
500 мл 10% Na SO и реэкстрагируют ронстар 3 x 50 мл н-гексана. Собирают
2 4
верхний слой, объединяют, высушивают, пропуская через безводный сульфат
натрия, и упаривают до 5 мл на ротационном испарителе. Остаток переносят
на колонку с 6 г окиси алюминия, промытую 12 мл смеси н-гексан - ацетон
(9:1). После того как раствор полностью впитается в слой адсорбента,
отгонную колбу смывают 5 мл смеси гексан - ацетон (9:1) и переносят на
колонку, операцию проводят 3 раза. Ронстар элюируют 100 мл смеси н-гексан -
ацетон (9:1). Элюат упаривают на ротационном испарителе досуха. Остаток
растворяют в 1 мл ацетона и 2 мкл вводят в испаритель хроматографа,
хроматографируют с ТИД в ДПР.
2.5.3. Эфирные масла
Навеску 10 г эфирного масла мяты, лаванды, шалфея, герани помещают в
делительную воронку емкостью 250 мл с 50 мл диметилсульфоксида, выдерживают
20 мин. для растворения. Прибавляют 50 мл н-гексана, встряхивает 2 мин. и
отделяют верхний слой. Операцию повторяют дважды. Оставшийся раствор
переносят в делительную воронку емкостью 500 мл с 200 мл 10% Na SO ,
2 4
предварительно насыщенного 15 мл серного эфира, и реэкстрагируют ронстар
серным эфиром 3 x 30 мл. Объединенные экстракты собирают, сушат, пропуская
через безводный сульфат натрия, и концентрируют досуха на ротационном
испарителе при температуре водяной бани 30 °C. К сухому остатку прибавляют
1 мл ацетона, встряхивают и 2 мкл вводят в испаритель хроматографа.
Хроматографирование проводят с ТИД.
УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ
┌─────────────────────────────────────────────┬─────────────┬─────────────┐
│ │ 5% SE-30 │ 5% XE-60 │
├─────────────────────────────────────────────┼─────────────┼─────────────┤
│Размер колонки, мм │100 x 3 │100 x 3 │
│Материал колонки │стекло │стекло │
│Форма колонки │спираль │спираль │
│Расход газа-носителя, мл/мин., при работе с │40 │40 │
│ТИД при работе с ДПР │60 │60 │
│Расход воздуха, мл/мин. │400 │400 │
│Расход водорода, мл/мин. │16 │16 │
│Температура испарителя, °C │230 │230 │
│Температура термостата колонок, °C │190 │190 │
│Хроматографируемый объем, мкл │2 │2 │
│Время удерживания ронстара, мин.: │ │ │
│при работе с ТИД │8,2 │11,5 │
│при работе с ДПР │17,5 │24,2 │
│Число теоретических тарелок: │ │ │
│при работе с ТИД │697 │681 │
│при работе с ДПР │784 │767 │
│ВЭТТ: │ │ │
│при работе с ТИД │1,4 │1,4 │
│при работе с ДПР │1,3 │1,3 │
│Линейный динамический диапазон, нг: │ │ │
│при работе с ТИД │0,5 - 500 │0,5 - 500 │
│при работе с ДПР │0,1 - 10 │0,1 - 10 │
│Рабочая шкала электрометра: │ │ │
│ │ -12 │ -12 │
│при работе с ТИД │100 x 10 А│100 x 10 А│
│ │ -12 │ -12 │
│при работе с ДПР │20 x 10 А │20 x 10 А │
└─────────────────────────────────────────────┴─────────────┴─────────────┘
2.6. Обработка результатов анализа
Количественный расчет препарата в анализируемой пробе проводят по следующей формуле:
H x V
1
X = ------ x A,
K x V
2
где:
X - количество ронстара в пробе, мг/кг;
H - высота пика препарата в анализируемой пробе, мл;
V - объем анализируемой пробы, мл;
1
V - объем инъектируемой пробы, мкл;
2
A - навеска, г;
K - калибровочный коэффициент, который определяется по следующей
формуле:
H H H
1 1 2 n
K = - x [------ + ------ + ... + ------],
n C x V C x V C x V
1 2 n
где:
H , H , H - высоты пиков стандартного раствора ронстара, мм;
1 2 n
V , V , V - объемы стандартного раствора ронстара, вводимые в
1 2 n
хроматограф, мкл;
C - концентрация стандартного раствора ронстара, 10 мкг/мл.
Содержание микроколичеств ронстара в пробах вычисляют как среднее из трех параллельных определений.
3. Требования безопасности
При выполнении операций по определению ронстара следует руководствоваться требованиями безопасности при работе с соединениями 3-го класса токсичности (ронстар), а также с легколетучими растворителями.