Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
19 октября 1979 г. N 2068-79
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФУНГИЦИДА БАЙЛЕТОНА МЕТОДОМ ТСХ В ПОЧВЕ,
КОРНЯХ, ЗЕЛЕНЫХ ЛИСТЬЯХ, ПЛОДАХ ТОМАТОВ И ОГУРЦОВ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
Байлетон (синоним: триадимефон) - бесцветный порошок, не имеющий запаха, эффективен против большого спектра грибов, особенно мучнисторосяных.
Активное вещество байлетона1-(4-хлор-фенокси)3,3-диметил-1-(1Н-1,2,4-триазолил-1)-2-бутанон.
---
Cl-// \\O-CH-CO-C(CH )
\ ___ / │ 3 3
--- N
/ \
/ \N
││ ││
N└───┘
Молекулярная масса 293,7. Температура плавления: 82,3 °С. Растворим в
воде (0,026 г действующего вещества на 100 г растворителя при 20 °С).
Хорошо растворяется в большинстве органических растворителей. Стабильность:
не разлагается в течение 24 часов при 20° в 0,1 н H SO и NaOH.
2 4
Байлетон, применяемый в рекомендуемых нормах расхода, нетоксичен. ЛД
50
для крыс при оральном введении равно 2500 мг д.в./кг живого веса.
Действующее начало фунгицида безвредно для пчел.
<...>
Пластинки для хроматографии "силуфол" размером 50 х 150 мм производство Чехословакии.
Пластинки стеклянные размером 50 х 150 мм с тонким слоем силикагеля.
Пульверизаторы для опрыскивания пластинок.
Ротационный испаритель ИР-1.
Сушильный шкаф.
Цилиндры мерные на 5, 10, 100 мл.
Часовое стекло.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1. Получение химически чистого байлетона
Из торговой фирмы 25% смачивающегося порошка байлетона готовят насыщенный раствор в этиловом спирте, помещают его на водяную баню при 35 - 40 °С и оставляют до полного растворения препарата. Затем раствор отфильтровывают и упаривают до небольшого объема и оставляют в холодильнике для кристаллизации. Выпавшие кристаллы отфильтровывают, промывают охлажденным этиловым спиртом и высушивают на воздухе.
Дополнительным критерием степени чистоты препарата служит хроматографическая индивидуальность, при определении которой стандартные растворы, будучи нанесенными на пластинку в количестве 5 - 10 мкг, не содержат посторонних пятен после хроматографирования.
2.4.2. Приготовление пластинок
Пластинки тщательно моются хромовой смесью, промываются проточной
водой, затем дистиллированной и сушат. Покрывают сорбционной смесью,
состоящей из 30 г силикагеля, 5 г сернокислого кальция и 100 куб. см воды.
(Силикагель измельчают, пропускают через сито и промывают с соляной
кислотой, уксусной кислотой, дистиллированной водой до нейтральной реакции
на метилоранж. Один раз промывают метанолом, высушивают 2 часа на воздухе и
4 часа сушат в сушильном шкафу при 120 °С. Получают силикагель с III
степенью активности по Брокману.) Сушат пластинки в горизонтальном
положении в течение 18 - 20 час. при комнатной температуре и хранят в
эксикаторе над CaCl .
2
2.5. Проведение определения
2.5.1. Экстракция
Почва. 100 г воздушно-сухой, просеянной через сито с диаметром 1 - 2 мм почвы заливают ацетоном до покрытия пробы и оставляют на ночь в колбе с притертой пробкой или экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 2-х часов. Полученный раствор отфильтровывают. Остаток в колбе и на фильтре промывают небольшими порциями растворителя. Общий экстракт упаривают до небольшого объема и хроматографируют. Сильно окрашенные растворы обесцвечивают путем добавления 5 - 10 г активированного угля.
Растительный материал. 10 г листьев, 20 г корней или побегов, 50 г плодов растирают с кварцевым песком и безводным сернокислым натрием, заливают тем же растворителем (ацетоном) и обрабатывают аналогично пробам почвы. После этого добавляют уголь, вытяжку для лучшего ее обесцвечивания выдерживают 30 мин. на водяной бане при 35 - 40 °С, затем перемешивают на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Раствор отфильтровывают, высушивают сульфатом натрия, упаривают и хроматографируют.
Примечание: при работе с оводненными плодами после выпаривания ацетона довольно часто на дне колбы остается вода, которая при 70 °С не выпаривается. В таком случае надо:
1. Добавлять небольшие количества ацетона (через б/в сернокислый натрий), взбалтывать и снова выпаривать. Так 2 - 3 раза до окончательного объема 0,1 мл.
2. Вводный остаток с насыщенным раствором поваренной соли (NaCl) добавить хлороформ, равный по объему жидкости, и экстрагировать препарат в течение часа на аппарате для встряхивания. Отделить хлороформ, пропустить его через б/в сернокислый натрий, а к жидкости снова добавить такое же количество хлороформа и еще раз поставить на качалку на 30 мин. Экстракты объединить, выпарить и хроматографировать.
2.5.2. Хроматографирование
Сухие остатки растворяют в 0,1 мл (4 - 5 капель) ацетона и наносят на хроматограмму. Обмывают колбу 3 - 4 раза по 0,1 мл растворителя и опять наносят так, чтобы размеры пятен не превышали 5 - 6 мм. Слева и справа от пробы наносят 3 - 5 мкг стандартного раствора. Пластинку высушивают и опускают в хроматографическую камеру. Приготовляют одну из подвижных фаз, наливают на дно камеры и опускают пластинку. Готовую пластинку оставляют на воздухе для просушки и опрыскивания проявляющим реактивом.
Байлетон проявляется, как правило, в виде двух синих пятен на желтом
фоне пластинки с R - 0,22 и R - 0,56 на пластинке "силуфол"; на
f1 f2
силикагеле соответственно - 0,16 и 0,44.
2.6. Обработка результатов анализа
Полуколичественное определение проводится путем визуального сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и стандартных растворов. Для получения количественных данных содержание байлетона определяют путем измерения площади пятен на хроматограмме с помощью кальки, протертой вазелиновым или растительным маслом. Площадь пятна высчитывают методом наложения кальки на миллиметровую бумагу.
Расчет результатов анализа производят по формуле:
A х S
пробы
X = --------------,
B х S
стандарта
где:
X - содержание препарата в пробе в мкг/г или мг/кг веса;
A - количество препарата, найденное путем визуального сравнения
размера и интенсивности пятен пробы и стандартного раствора в мкг;
B - вес или объем исследуемой пробы;
S - площадь пятна анализируемой пробы в кв. мм;
пробы
S - площадь пятна стандартного раствора в кв. мм.
стандарта
2.7. Требования безопасности
Необходимо соблюдать требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями, концентрированными кислотами.
Строго руководствоваться "Правилами по технике безопасности в химических лабораториях".
Примечание. ДОК и ПДК байлетона не установлены.
2.8. Литература
Specht W. Methode zur gaschromatographischen Bestimming der Fungizide Fuberidazol, Fluotrimazol und Triadimefon in Pflanzen und Boden-Pflanzenschutz Nachr. Bayer, 1977, 30, 1: 55 - 71.
Настоящие Методические указания по определению остаточных количеств фунгицида байлетона в почве, корнях, зеленых листьях, плодах томатов и огурцов методом ТСХ разработаны:
1) Бажановой Ниной Васильевной - ст.н.с. в лаборатории биохимии растений и вредных организмов института защиты растений МСХ Армянской ССР.
2) Аветисян Каринэ Вараздатовной - мл.н.с. в лаборатории биохимии растений и вредных организмов института защиты растений МСХ Армянской ССР.
3) Папоян Фрунзе Артаваздовичем - зав. отдела фитопатологии института защиты растений МСХ Армянской ССР.