Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
3 января 1985 г. N 3198-85
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СУЛЬФИДОФОСА В МЯСЕ, МОЛОКЕ И КОРМАХ
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
Сульфидофос - 0,0-диметил-0(3-метил-4-метилтиофенил)тиофосфат, действующее вещество - фентион.
Структурная формула:
CH O S CH
3 \ // --- / 3
P -O-// \\-S-CH C H O PS
/ \ ___ / 3 10 15 3 2
CH O ---
3 М.м. 278,3.
Химически чистое вещество - бесцветная маслянистая жидкость с температурой кипения 105 - 109 °С при 0,01 мм рт. ст., давление пара при 20 °С - 3 х 10 мм рт. ст., летучесть - 0,46 мг/куб. м. Растворимость в воде при 20 °С около 54 мг/л. Хорошо растворим в большинстве органических растворителей. Гидролизуется в кислой и щелочных средах.
Выпускается в виде 50-процентного эмульгирующего концентрата.
Действующее вещество препарата умеренно токсично для теплокровных животных.
ЛД для крыс при оральном применении - 250 мг/кг. Нанесение на кожу крыс
50
1000 мг/кг не вызывает симптомов отравления.
Сульфидофос является инсектицидом контактного и кишечного действия. Наряду с высокой токсичностью в отношении некоторых насекомых обладает длительным защитным действием.
Сульфидофос опасен для пчел, и его нельзя применять во время цветения растений.
Синонимы сульфидофоса - байтекс, лебайцид, тигувон.
2. Определение сульфидофоса в мясе, молоке и кормах
методом тонкослойной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении сульфидофоса из проб исследуемых объектов
органическими растворителями, очистке и концентрировании экстрактов с
последующим хроматографическим разделением на тонком слое сорбента и
проявлением. Идентификацию препарата проводят по величине R
f
соответствующих стандартов, а количественное определение - путем измерения
площадей пятен пробы и стандартов, учитывая визуально интенсивность их
окраски.
2.1.2. Избирательность метода
Определению сульфидофоса не мешают пестициды, применяемые в настоящее время в сельском хозяйстве.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Сульфидофос определяемых концентраций 0,05 - 1 мг/кг. Предел обнаружения 0,5 мкг в анализируемой пробе, что соответствует 0,05 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств составляет в органах и тканях 90%, в кормах - 80%, число параллельных определений n = 5.
2.2. Реактивы и растворы
Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79; хлороформ, х.ч., ТУ 6-09-4263-76; н-гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78; спирт-ректификат 96%, ТУ 6-09-1710-77; сернокислый натрий б/в, ч.д.а., ГОСТ 4166-76; бромфеноловый синий, ч.д.а., ТУ 6-09-3719-83; азотнокислое серебро, х.ч., ГОСТ 1277-75; лимонная кислота, х.ч., ГОСТ 3652-74.
2.3. Приборы и посуда
Хроматографическая пластинка "Силуфол" (ЧССР), хроматографическая камера, пипетки и микропипетки разные, колбы мерные, склянки с притертой пробкой, стеклянные палочки, стеклянные воронки, делительные воронки, фарфоровые чашки, фильтровальная бумага, обезжиренная вата, ступка.
Приготовление стандартного раствора сульфидофоса. На торсионных весах взвешивают 10 мг препарата и растворяют в мерной колбе 100 мл ацетона. В одном мл содержится 1 мкг препарата.
Приготовление проявляющего реактива. Смесь растворов бромфенолового синего и азотнокислого серебра. 1) 0,5-процентный водно-ацетоновый раствор азотнокислого серебра (1:3); 2) 0,05 г бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона. Последний разбавляют раствором азотнокислого серебра до объема 100 мл. Раствор хранят в холодильнике. Срок хранения 10 дней.
Лимонная кислота 2-процентный раствор. Необходима для осветления фона пластинки после опрыскивания проявляющей смесью.
2.4. Описание определения
2.4.1. Экстракция и очистка
Ткани животных. Исследуемые пробы мышц, печени, почек, сердца, легких и др. весом 10 г тщательно измельчают, переносят в склянки с притертой пробкой, добавляют 10 - 15 г сернокислого безводного натрия, перемешивают стеклянной палочкой и экстрагируют 30 мл хлороформом при комнатной температуре в течение одного часа. Затем экстракт фильтруют через смоченный бумажный фильтр в фарфоровую чашку и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в 5 мл 20-процентного спиртоводного раствора. Экстракт переносят в делительную воронку, сюда же добавляют 25 мл дистиллированной воды и 30 мл хлороформа. Осторожно смесь взбалтывают в течение 2-х минут. Отделяют хлороформ и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в 0,5 мл ацетона и хроматографируют.
Молоко. Пробы молока (10 мл) переносят в склянки, добавляют 30 мл ацетона и взбалтывают в течение 2-х минут. Затем экстракт фильтруют через вату в фарфоровую чашку, добавляют 70 мл дистиллированной воды и ставят в морозильную камеру холодильника на 1 час. После чего экстракт через обезжиренный слой ваты фильтруют в делительную воронку и экстрагируют с 30 мл хлороформа в течение 2-х минут. Отделяют хлороформ и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в 5 мл 20-процентного спиртоводного раствора. Дальнейший ход анализа такой же, как и при определении препарата в тканях животных.
Зеленые растения (клевер, трава и т.д.). Пробы весом 5 г измельчают, переносят в склянки с притертой пробкой, добавляют 10 г безводного сернокислого натрия, перемешивают стеклянной палочкой и экстрагируют 30 мл хлороформа при комнатной температуре в течение одного часа. Затем экстракт фильтруют через смоченный хлороформом бумажный фильтр в фарфоровую чашку и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл 20-процентного спиртоводного раствора, перемешивая стеклянной палочкой. Экстракт фильтруют через смоченную спиртоводным раствором вату в делительную воронку. Дальнейший ход анализа такой же, как и при определении препарата в тканях животных.
2.4.2. Хроматографирование
Анализируемый экстракт наносят при помощи микропипетки в одну точку на
расстоянии 1,5 - 2 см от края пластинки так, чтобы диаметр пятна не
превышал 1 см. Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см наносят
стандартный раствор, содержащий 0,5, 1 и 5 мкг препарата. Пластинки с
нанесенными растворами помещают в камеру для хроматографирования, в которую
налита смесь н-гексана и ацетона в соотношении 20:80. Край пластинки с
нанесенными растворами должен быть погружен в растворитель не более чем на
0,5 см. Пластинку выдерживают в камере до тех пор, пока фронт растворителя
не поднимется на высоту 10 см. После чего ее вынимают, отмечают фронт
растворителя, подсушивают на воздухе и опрыскивают сначала смесью растворов
бромфенолового синего и азотнокислого серебра. Затем пластинки опрыскивают
2-процентным раствором лимонной кислоты. В присутствии сульфидофоса сразу
же после опрыскивания на желтом фоне сорбента появляются ярко-синие пятна в
зависимости от концентрации препарата. Чувствительность метода составляет
0,05 мг/кг, R сульфидофоса равна 0,5. Точность метода в зависимости от
f
объекта составляет 80 - 90 +/- 10%.
2.5. Обработка результатов
Расчет производят по формуле:
х С
Х = ---,
с в
где:
Х - содержание препарата, мг/кг, мг/л;
х - площадь пятна исследуемой пробы, кв. мм;
с - площадь пятна стандарта, кв. мм;
С - количество препарата в стандарте, мкг;
в - навеска пробы, г.
3. Требования безопасности
Соблюдаются требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами и фосфорорганическими соединениями.
4. Настоящие Методические указания разработаны Т.Г. Аббасовым и Г.У. Узаковой (ВНИИ ветеринарной санитарии).